Мхк культура это: Мировая художественная культура

Posted on by alexxlab

Содержание

Мировая художественная культура

Понятие художественной культуры

Определение 1

Художественная культура – это один из самых ярких видов культуры, который выступает в качестве ее устойчивого компонента, передающего с помощью образно-символического варианта ценности культуры, которые были созданы людьми в разные исторические периоды.

Являясь сферой культуры, художественная культура призвана решать задачи интеллектуального и чувственного отражения бытия посредством художественных образов, рождающихся в мышлении художника.

Художественную культуру изучали:

  • Философия
  • Эстетика
  • Исторические науки
  • Литературоведение

Структура художественной культуры:

  • Художественное творчество
  • Организационную инфраструктуру
  • Материальную инфраструктуру
  • Художественное образование
  • Художественную критику
  • Художественные образы
  • Эстетические взгляды
  • Техническую эстетику и дизайн
  • Государственное урегулирование этой области

Замечание 1

В художественную культуру включены художественные ценности и идеалы, которые обладают эстетическими качествами. Для эстетической оценки и деятельности важное значение имеет лежащая в их основе понимание прекрасного, имеющее социальную и историческую определенность. Однако имеются художественные ценности, которые носят вневременной характер, это ценности – шедевры мировой культуры, к примеру, Монна Лиза, произведения Пушкина, Моцарта, Чайковского и др.

Являясь частью творческой деятельности, прекрасное имеет основные эстетические категории:

  • Возвышенное
  • Низменное
  • Комическое
  • Трагическое

Как правило, в большинстве случаев художественная культура является синонимом к искусству, но между ними имеются различая.

Художественная культура является сложным системным образованием и при ее анализе можно выделить сходство и различия в однопорядковых, но не однозначных феноменах – искусства и художественной культурой.

Подсистемы художественной культуры

Следует отметить, что художественная культура имеет в себе $2$ значительные подсистемы:

Первой подсистемой является искусство, которое выступает в качестве особого рода творческой деятельности, результатом которой становится преобразование мира согласно законам красоты.

В искусстве выделяют прикладное искусство, дизайн, в которое входит около ста его видов, например, декорирование, кулинария, а так же выделяют чистое искусство, в структуру которого входят:

  • Архитектура
  • Изобразительное искусство
  • Музыка
  • Литература
  • Танец
  • Театр
  • Кинематограф

Замечание 2

Для творческой деятельности чистого искусства характерным является произведение художественной и образной системы. Художественный образ является сутью искусства, который является ключевым для всех его жанров и видов.

Художественный образ представляется в виде образа человека и мира, который перерабатывается в сознании творца, музыканта, художника, писателя, скульптора, архитектора, актера и т.д. Художественный образ выражается через краску, звук, форму.

Искусство понимается в виде творческой, инновационной деятельности, которая направлена на поиск новых художественных форм. К важному понятию искусства относится категория прекрасного, а бытием искусства становится процесс творческого познания мира.

Ко второй подсистеме художественной культуры относятся общеобразовательные учреждения и организации, которые дают возможность окунуться в художественные традиции, приобщиться к художественным идеалам и ценностям.

Художественная культура имеет свою характерную логику развития, в которой объединяются традиции и новаторство.

Предмет «Мировая художественная культура» в старшей школе: история и реальность

Широко развернувшаяся в обществе полемика вокруг проекта федеральных государственных образовательных стандартов для старшей школы и уровень культуры современного молодого поколения побуждают обратиться к опыту реформирования российской школы в начале XX столетия. Особый интерес в этом плане представляет предмет «Мировая художественная культура» на старшей ступени школы, история его появления в учебных планах, место и роль в деле формирования общего культурного кругозора и мировоззрения юношей и девушек. Вообще речь о необходимости изучения подобного предмета в старшей школе зашла еще в 1915 году, когда Министр народного просвещения П. Н. Игнатьев настойчиво пытался осуществить реформу средней школы в России. «Ознакомление с памятниками искусства» – так предположительно должен был называться предмет, который относился к числу воспитательных на второй, в то время завершающей, ступени школы. Отметим, что две ветви (профили в терминологии того времени) второй ступени школы – новогуманитарная и гуманитарно-классическая, — предполагали обязательное ознакомление с памятниками искусства. И лишь в реальной школе завершающая ступень образования предполагала изучение черчения.

В целом проект той реформы стал чрезвычайно важным для предметов искусства в средней общеобразовательной школе. Именно в этом проекте имелся специальный раздел, посвященный эстетическому воспитанию, что определяло статус предметов искусства как обязательных для изучения в средней школе. Более того, к делу эстетического воспитания предъявлялись особые требования: «соответствующая постановка преподавания таких предметов, как рисование, лепка, пение, музыка, организация ученических хоров, оркестров, планомерное посещение учащимися опер и концертов, изучение памятников искусства и т. д.; культурный внешний вид школы и художественное оформление их» [1; 175]. Подчеркивалась и тесная взаимосвязь нравственного, интеллектуального, эстетического и физического воспитания в школе, а также реализация «трудового принципа в обучении», и соответствующее обеспечение учебного процесса (оборудованные помещения для занятий с учащимися по рисованию, музыке, пению и т. д.). Остается только сожалеть о том, что все эти попытки реформирования так и остались на уровне проектов. Тем не менее данный проект реформирования средней школы в России сыграл свою роль: в нем предопределено полноправное наличие предметов искусства, в том числе и на завершающей ступени школьного образования в учебных планах и программах, появившихся после 1917 года.
О том, насколько ответственно и серьезно подходили к решению проблем школы второй ступени Отделы Народного Образования в начале 20-х годов прошлого столетия, можно составить некоторое представление при рассмотрении Программы по истории культуры в школе второй ступени. Эта программа была разработана Оренбургско-Тургайским Губернским Отделом Народного Образования и утверждена в 1921 году Наркомпросом РСФСР [2]. Содержание Программы по истории культуры, безусловно, политизировано, и достаточно большой объем здесь занимают различные вопросы политической экономии, развития капитализма в России, наѐмного труда и капитала и др. Но при всем этом предполагалось рассмотрение происхождения искусства, героического эпоса раннего феодализма, мировоззрения городского общества, морально-философского элемента религии и расцвета искусства при Афинской демократии, культурного объединения в Римской империи, арабской науки, городской культуры «Возрождение», придворной культуры, классицизма в литературе и изобразительном искусстве во времена абсолютной монархии во Франции, литературы и театра при Елизавете (Англия), придворной культуры и проникновения культурных влияний с Запада в России XVIII веке и др. [2; 184–216].
Еще одним показательным примером отношения к предметам искусства (История культуры, Рисование, Пение), а в общем к уровню культуры школьников, являются Программы семилетней трудовой школы для школ Рославльского уезда [3]. Так, на предмет История культуры, изучаемый в 5, 6 и 7-х классах, отводится по три часа в неделю, а в задачах курса есть и такие, как установление закономерностей исторических явлений, законов их развития, особенности развития отдельных культур, стран и народов и преемственность культуры и др. Само содержание предмета, представленное в программе, возможно дано и не так обширно по сравнению с предыдущим примером [2; 184-216]. Но, тем не менее, здесь есть и такие темы: что такое история культуры? древнейшие центры культуры, памятники, наука, искусство и письмена, общегреческие праздники и их значение, художественное развитие Афин (искусство), греческий театр, классический период римской литературы и римский театр, византийская культура, церковь и духовная культура, арабская наука, литература и искусство, средневековая наука и искусство и др. [3; 60–62].
Разработанные школьными работниками г. Владивостока программы школ II ступени весьма интересны во многих отношениях, и в первую очередь попыткой реализации преемственности на двух имеющихся ступенях образования. Напомним, что в Приморье, в 1922–1923 гг. создавалась девятилетняя школа в ее новой структуре – четырехгодичная первая ступень и пятигодичная вторая в составе двух концентров, где на первый концентр отводилось три года, на второй – два года (если соотнести со структурой современной школы, то начальное обучение – четыре года, среднее – три, и завершающая ступень – два года обучения). В нашем случае особый интерес представляет первый и второй концентр второй ступени школы, поскольку, несмотря на специфику каждого из концентров, есть и весьма существенное основание, их объединяющее.
В задачи первого концентра входили и такие, как «развить физические и духовные силы учащихся, содействовать развитию мировоззрения и дать новые знания, необходимые … для участия в общем труде … и для разумного устроения личной жизни и сознательного отношения ко всему окружающему» [4; 89–90]. В целом весь комплекс задач носил образовательно-воспитательный и практически-прикладной характер, так как предполагалось, что по окончании этого концентра большинство учащихся «приступит к труду», или будет получать какую-либо профессиональную подготовку в специальных школах, техникумах. В Учебном плане присутствуют и предметы художественно-эстетического цикла: рисование – 2 часа в неделю все три года обучения, пение (хоровое) – 1 час в неделю первый и второй годы обучения, ручной труд (что впоследствии преобразуется в художественный труд) – два часа в неделю на протяжении трех лет обучения.
Особо стоит сказать и о таком предмете первого концентра школы II ступени, как история культуры (в контексте изучения истории), на изучение которой отводится 3 часа в неделю, а в содержании обучения имеются и разделы, посвященные происхождению искусства, возникновению науки, эволюции религиозных представлений, возникновению позитивной науки, расцвету искусства, эллинизму, синкретизму религиозных культов, религиозной окраске духовной культуры, феодальной культуре и культуре Киевской Руси, светскому характеру науки, искусств, философии и литературы, тяге к светскому знанию, придворной и дворянской культуре, зачаткам буржуазной культуры, отражению застоя в культурной жизни Западной Европы, проникновению культурных влияний с Запада в связи с развитием внешней торговли и др.
Интересным видится принципиальный подход к содержанию образования в этом концентре, где предполагалось «устранение из курса каждого учебного предмета более сложных, чисто теоретических отделов, стремление установить связь знания с жизнью, а также внутреннюю связь и между частями всего курса в целом (объединение планиметрии с стереометрией, зоологии с ботаникой, географии с естествознанием, анатомии, физиологии человека и растений)» [4; там же]. Здесь просматривается явный, выражаясь современными понятиями, интегрированный подход к обучению, что находит подкрепление и в предлагаемых далее конкретных способах к его организации: объединение всей учебно-воспитательной работы в одно целое.
В Учебном плане даются и рекомендации методического характера, суть которых сводится к пояснению того, каким образом можно достичь «одного целого»: поиск общих для всех предметов тем или циклов тем, согласование и объединение отдельных частей общего курса, соединение взаимно дополняемых отраслей знания, естественное и полное слияние элементов одного учебного предмета и др. Это, по сути, интегрированные учебные курсы, интеграция содержания образования в ее современном преломлении. Хотелось бы подчеркнуть, что в современной педагогике в области искусства, существует самостоятельное направление, научная школа, разрабатывающая идеи интегрированного обучения и полихудожественного воспитания детей [5, 6 и др.]. Вместе с тем в Учебном плане с общими замечаниями к нему подчеркивалась необходимость сохранения конкретности и жизненности материала, активно-трудового исследовательского подхода к его проработке, «развитие у учащихся способностей наблюдать и классифицировать, ставить простейшие проблемы и искать пути и способы для их разрешения» [4; 89–90]. Таким образом, школа второй ступени первого концентра представляет собой удивительный пример интегрированного (в современном прочтении) обучения, где содержание и методы направлены на достижение единого «гармонического комплекса» для всестороннего и практически ценного воспитания учащихся, «перехода из школы в трудовую жизнь и для продолжения образования» [там же].
Второй концентр второй ступени школы (на современном языке профильное обучение на завершающей ступени общего образования) предполагает введение в учебный план новых отраслей знания, а также расширение и углубление тех сведений, которые учащиеся получили в первом концентре. Основной задачей последних двух лет обучения выдвигается следующая – «систематическое «среднее» образование и установление связи между школой второй ступени и высшей школой» [4; 89–90].
Учебный план содержит общие пояснения в отношении того, что, собственно лежит в основе содержания образования. Достаточно упомянуть такие позиции, как расширение и систематизация знаний, теоретическое обоснование и обобщение опытных данных, практических и интуитивно воспринятых положений, изучение законов различных явлений природы или общественной жизни, применение основных методов исследования, присущих той или иной науке. Но главное, что данный концентр подразумевает наличие бифуркации (разделение учащихся на две группы на старшей ступени общеобразовательной школы для обучения в соответствии с индивидуальными склонностями, интересами школьников) в двух формах, частичной и полной. Частичная бифуркация предполагает общий учебный план в количестве 28 часов в неделю, куда, кстати, входят такие предметы как рисование, ручной труд и история (в контексте развития культуры) по два часа в неделю, а также по 6 часов специальных дополнительных занятий по отдельным циклам знания. В зависимости от определившихся у школьников «индивидуальных склонностей, интереса и желания», учащиеся делятся на две группы – словесно-историческую и естественно-математическую, те самые «отдельные циклы знания», изучаемые по 6 дополнительных часов.
Так называемая полная бифуркация представляет собой разделение всего курса на два отделения – словесно-историческое и естественно-математическое, причем суммарное число часов соответственных отраслей знания на каждом из отделений находится в обратном отношении. Предметы художественно-эстетического цикла присутствуют и в этом случае, хотя и не в полном объеме (нет хорового пения): ручной труд – по два часа в неделю на двух отделениях в течение двух лет; рисование – на двух отделениях, причем на словесно-историческом в первый год – по два часа в неделю, во второй – по часу; на естественно-математическом – в первый год по три часа в неделю, во второй – по два, из которых по одному часу предусмотрено на урок черчения. История культуры присутствует только на словесно-историческом отделении по два часа в неделю. Стоит подчеркнуть, что полная бифуркация предлагается только «в качестве материала для предварительного обсуждения на местах вопросов об особенностях работы, … о комбинировании курсов, о присоединении иных отделений (полифуркация)», поскольку реализация этого варианта требует особых условий, в числе которых наличие приспособленных помещений и оборудования, подготовленных педагогических кадров и др. Особого упоминания заслуживает и заявленный в учебном плане путь «коренного изменения самих методов работы»: «не сообщение преподавателем только готовых сведений, а также добывание их самими учащимися», развитие умения «владеть методами
исследования реальной действительности, «подведение» учащихся к истокам знания и др. [4; 90].
Для истории российского образования старшеклассников этот пример профильного обучения весьма интересен и показателен по многим аспектам: четко продуманная структура организации образования, содержание, где присутствует органическая преемственность с материалом предыдущей ступени обучения, методы, побуждающие школьников к самостоятельной работе и сами предлагаемые формы организации занятий (диспуты, лабораторные исследования, экскурсии, опыты и эксперименты, самостоятельная работа в мастерских, библиотеках, музеях и т. п.). Можно лишь с известной долей разочарования размышлять о причинах, которые не позволили (это очевидно из более поздних Положений, Примерных учебных планов и Программ, Декретов, Постановлений и т. д.) воплотить в полной мере именно этот вариант программ школ второй ступени, а в целом – реализовать заявленные цели и задачи обучения на завершающей ступени общеобразовательной школы.
Приведенные примеры, говоря современным языком, регионального опыта разработки примерных программ по искусству как для первой, так и для второй ступени школьного образования свидетельствуют о многом. В первую очередь – о последовательном воплощении в жизнь идей «Положения о Единой трудовой школе» и «Основных принципов Единой трудовой школы» (1918), и в особенности того, что касается обучения на старшей ступени школы (полной и частичной бифуркации и положения предметов искусства на завершающей ступени общего образования). Знаменательным фактом является и то, что предметы искусства, до 1917 года представленные рисованием, пением и черчением преимущественно на начальном периоде обучения, имеются теперь и в содержании обучения старшеклассников и дополняются, кроме того, музыкой (точнее, в большинстве случаев слушанием музыки) и историей культуры.
Несмотря на вполне объяснимые трудности проведения реформ в то время, именно тогда появляется специализированная подготовка в области искусства на старшей ступени общеобразовательной школы. Свидетельствуют об этом Программы-минимум Единой трудовой школы первой и второй ступени [7]. В целом этот документ раскрывает исключительно мудрое отношение к искусству и вызывает глубокое уважение к разработчикам, претворяющим главное дело. Общая задача школы заявлена так: «Но трудовая школа, как школа, через которую должно пройти все население СССР, не выполнит своей задачи, если не даст учащимся основ художественной культуры…» [7; 11]. При этом отмечается двоякая задача школы в отношении преподавания лепки и рисования, с одной стороны, «приобретение навыков, необходимых в практической жизни», с другой – «поднятие уровня художественной культуры и развитие художественно-творческих сил учащихся» [7; 1]. Здесь же даются и варианты девятилетнего образования (Программа по черчению в Единой Трудовой Советской школе с коммунальным уклоном. Цикл художественно-промышленный. 8 и 9 годы обучения; Программа по черчению в школе с индустриально-техническим уклоном. 8 и 9 годы обучения и др.).
В ряду важнейших содержательных и методических позиций стоит отметить, на наш взгляд, самое главное. Во-первых, показательная во всех отношениях главная задача современной школы – «вызвать творческую продуктивную деятельность», «на место пассивного восприятия сведений, преподносимых в рецептурной форме, она (имеется ввиду школа – Л. А.) ставит личный опыт, личную исследовательскую работу и личные переживания» [7; 4]. Вполне понятна взаимосвязь этой задачи с развитием наблюдательности, памяти, концентрации внимания, образного мышления и творческого воображения и т.п., и это в полной мере находит отражение в программах как на уровне целей и задач, так и в плане представленного содержания обучения по предметам искусства на старшей ступени школы.
Вторая позиция связана с поставленной в то время задачей «воссоздания нашей промышленности на новых началах» и настоятельной потребностью того времени обеспечить все отрасли промышленности «просвещенными, графически-грамотными и художественно-образованными руководителями, мастерами и рядовыми рабочими» [7; 5–6]. К этому стоит добавить и то, что данные программы-минимум учитывают «современные педагогические течения», и поэтому рассматривают искусство в целом как «способ выражения мыслей, равноценный слову и письму, как всемирный, всем доступный язык образов» (там же). Интересна позиция, обозначенная здесь, и в отношении основ преподавания искусств в школе. Например, говорится о том, что школа должна дать учащимся «некоторую сумму знаний и навыков», с помощью которых можно было бы «разбираться в вопросах искусства, понимая последние как художественную организацию ощущаемых явлений природы». Занятия искусством необходимо проводить таким образом, чтобы школьники могли «проникнуться духом современной культуры», ощутить потребность к «художественно-творческой работе». При этом подчеркивается необязательность подготовки в школе будущих «художников-специалистов», и отмечается органичность занятий искусством «с трудовыми процессами, …с жизнью, с работой в школе и со всем ее бытом» [7; 12].
В отношении более конкретных задач второго концентра отмечается направленность на дальнейшее «поднятие» уровня художественной культуры, и более уместные для этого возраста методы работы: беседы по вопросам искусства, посещение художественных музеев и выставок, театров и концертов и т. д. В этих программах мы находим еще одно подтверждение принципиально важной для нас позиции разработчиков: предметы искусства в школе второго концентра второй ступени (завершающей ступени общего образования) представлены как в общеобразовательной части для всех уклонов (профилей), так и в содержании специальных частей (профильных). На современном языке это можно назвать интеграцией искусства в систему специализированной подготовки (профильного обучения) в старших классах общеобразовательной школы. К примеру, коммунальный уклон предполагал промышленно-экономический цикл и медицинский цикл, где рисованию обучали по одному часу в неделю и в соответствии с характером самой специализации. Педагогический цикл этого же уклона (профиля) предполагал два часа в неделю на усвоение техники рисования, лепки, конструирования и т. п. Сельскохозяйственный цикл кооперативного уклона также предусматривал по два часа в неделю на изучение «Методов изображения» в восьмом и девятом классе [7; 41–43].
Начиная с 1927 года, разрабатываются специальные программы и инструктивные материалы, обусловленные «опасностью войны, особенно обострившейся за последнее время» [8; 3–4]. В школе того времени начинается «идеологическая подготовка молодежи» и постановка на должной высоте охраны здоровья детей и физкультуры. Вполне понятно, что в связи с этим выдвигаются иные задачи школы, иная, «общественно-политическая» направленность учебно-воспитательной работы, иные требования ко всему содержанию обучения. При этом пока еще сохраняется и сама школа второй ступени, и различные уклоны (профили) с многообразными отделениями (циклами) во втором концентре. Наибольшее значение из предметов искусства приобретает литература, при изучении которой «следует стремиться к эмоциональному воздействию на учащихся», «разбору художественных образцов», связанных с «героическим прошлым Красной армии» (там же).
Искусство в школе, в том числе и на старшей ступени, отодвигается не только в связи с «обострившейся опасностью войны». Несмотря на возросший уровень общего образования населения страны (в 1912 году среди достигших призывного возраста молодых людей был неграмотен каждый третий, к 1927 году – каждый десятый), в массовой школе сохраняются такие «отрицательные явления, как отсев и второгодничество», исключение «детей нетрудового населения», тяжелые материальные условия детей «низкооплачиваемых групп рабочего класса, батраков и бедняков» и т.п. (8; 56]. Положение осложнялось и постановкой трудового воспитания в школе, сугубо экономическими трудностями профессиональной подготовки в старшем концентре второй ступени, все еще значительным числом детей, особенно от 12 до 16 лет, вообще не учащихся в школе [9; 148]. Появление в 1930 году Постановления ЦК ВКП (б) «О всеобщем обязательном начальном обучении» свидетельствует о явном намерении «ликвидировать культурно-техническую отсталость», обеспечить «дальнейшее развитие культурной революции» и т.д., и на наш взгляд, является скрытым признанием неудач в осуществлении прежнего курса реформирования школы [10].
Дальнейшие документы по различным вопросам образования (например, Постановление ЦК ВКП (б) «О начальной и средней школе» от 25 августа 1931 года), нацелены на «политехнизацию школы», «соединение школьного обучения с производительным трудом и общественной работой», на получение учащимися достаточного уровня общего образования. В связи с этим предлагается пересмотреть программы обучения, перераспределить учебный материал для групп учащихся второго концентра. На изучении искусства это отразилось следующим образом: в учебные программы по обществоведению, литературе, языкам, географии и истории (на уровне Постановления ЦК ВКП (б) от 25 августа 1932 года) было предложено «ввести важнейшие знания, касающиеся национальных культур народов СССР, их литературы, искусства, исторического развития…» [11; 162]. И это было одной из весомых причин, надолго «закрывших» изучение предмета «История культуры» для учащихся старших классов российской школы.
Общая ситуация в отношении изучения этого предмета на завершающей ступени школы коренным образом меняется в 1969 году (подробно см.: О проблемном Совете по эстетическому воспитанию при Президиуме Академии педагогических наук СССР / В сб.: Вестник Международного Совета по музыкально-художественному образованию (к 100-летию Д. Б. Кабалевского) // Отв. за выпуск Е. Д. Критская, М. С. Красильникова.– М.: Прайм Сервис, 2004). Напомним, на третьей сессии (13–15 апреля, 1971 г.) с докладом «Решение Коллегии Министерства Просвещения СССР «О мерах улучшения эстетического воспитания школьников и задачах проблемного Совета» выступили М. И. Кондаков и Д. Б. Кабалевский; здесь же обсуждалась программа курсов «История мировой культуры», «Основы искусства кино» (сост. Л. М. Предтеченская и группа научных сотрудников АПН СССР под руководством членов Совета – Г. Л. Рошаля и И. Л. Любинского).
Итогом той большой работы, начатой в конце 60-х годов, стала не только разработка принципиального нового программного, учебного и методического обеспечения уроков искусства в начальной и средней школе, но и введение на старшей ступени школы предмета «Мировая художественная культура». В том же 1971 году проект программ факультативных курсов по истории мировой культуры был издан и разослан для обсуждения и опытной проверки в областные Институты усовершенствования учителей всех областей РСФСР и научно-исследовательские институты всех союзных республик [12]. В 1977 году Министерство Просвещения РСФСР после официального издания программы разрешило ее экспериментальную проверку в качестве варианта обязательного предмета на старшей ступени общеобразовательной школы.
К середине 80-х годов был опубликован ряд трудов Л. М. Предтеченской, посвященных различным методическим аспектам преподавания мировой художественной культуры в школе (см.: Предтеченская Л. М. Мировая художественная культура в старших классах общеобразовательной школы // В кн.: Музыкальное воспитание в СССР. – Выпуск 1. – 1978. – С.151 – 234; Метод художественно-педагогической драматургии в системе организации преподавания курса МХК // Музыка в школе, №4, 1984; Методика преподавания мировой художественной культуры в 8 классе. – М.: НИИ школ, 1984; Методика преподавания мировой художественной культуры в 9 классе. – М.: НИИ школ, 1985 и др.). И в 1988 году этот курс Решением Коллегии Министерства Просвещения РСФСР получил статус обязательного учебного предмета в старших классах общеобразовательной школы [13]. В этом контексте логичным представляется рассмотрение программы Предтеченской Лии Михайловны, усилиями которой в учебном плане завершающей ступени общеобразовательной школы после более чем полувекового перерыва появился предмет «Мировая художественная культура».
Во-первых, необходимо сказать о том, что утверждению этого предмета в школе способствовали, по словам самой Лии Михайловны, два человека. Это Анатолий Иванович Тодорский, директор средней общеобразовательной школы № 397 г. Ленинграда, где Предтеченская вела курс мировой художественной культуры в старших классах. И Дмитрий Борисович Кабалевский, который, узнав о предмете, приехал в школу, посетил занятия по мировой художественной культуре и пригласил обсудить программу этого курса на заседании проблемного Совета по эстетическому воспитанию при Президиуме АПН СССР [13]. С этого момента и начался процесс «вхождения» мировой художественной культуры в школы России.
Результатом работы НИИ школ Министерства Просвещения РСФСР стала программа по мировой художественной культуре, разработанная под научным руководством академика АПН СССР, доктора искусствоведения Д. Б. Кабалевского. Объяснительная записка к программе отмечает, что принципы ее построения, содержание и методическая система преподавания нацелены на использование «силы воздействия различных искусств в их комплексе для формирования личности старшеклассника, его идейно-нравственных убеждений, эстетической воспитанности, составляющих основу мировоззрения и жизненной позиции» [14; 3]. Указывается на принципиальную основу разработанной программы — педагогическую концепцию преподавания искусства в школе, преемственность с идеями, заключенными в новой программе по музыке, комплексность и синхронность в изучении отечественной и зарубежной художественной культуры и различных видов искусств (литература, изобразительное искусство, музыка, кино). Принципом построения курса определяется интеграция, что открывает широкие возможности в плане реализации глубоких и разносторонних связей с предметами гуманитарного и эстетического циклов.
Выдвигаемые разработчиками задачи призваны «создать условия для живого общения учащихся с шедеврами мирового искусства» (причем не только на уроках, но и на внеклассных занятиях и во внешкольной жизни), «обогащать духовный мир» и «воспитывать чувства», «развивать у всех учеников понимание искусства, способность быть читателем, зрителем, слушателем», «помочь овладеть языком искусства» [14; там же]. Интересно, что эта программа, рассчитанная на один час в неделю на протяжении трех лет обучения (восьмой, девятый и десятый классы), предусматривает знакомство учащихся лишь с творчеством крупнейших деятелей классического и современного искусства, в связи с чем в ней содержится три части. В первой части рассматривается мировая художественная культура XVIII в. – 50-х годов XIX в., во второй – 60-х гг. XIX в. – начала XX в. и в третьей – художественная культура новейшего времени. Для успешного освоения курса важна и последовательность, определяемая разработчиками, т.е. предполагается изучение от «более понятных» художественных образов литературы — к изобразительному искусству и музыке, рассмотрение в первую очередь общих для различных стран явлений мировой культуры, а затем – знакомство с культурой отечественной.
Показательна и некоторая вариативность этой программы, что подразумевает возможность замены какого-либо произведения в теме, или даже выбор другого автора из числа предложенных в дополнительном материале. Оговариваются и нестандартные формы проведения уроков, такие как «урок-путешествие с героями по страницам романа»,«уроки-концерты», «уроки-дискуссии». Например, для проведения дискуссий предлагаются такие темы: «проблема войны и мира», «искусство в борьбе за нравственное здоровье общества», «радость созидательного труда в искусстве прошлых эпох и в современном искусстве», «искусство о роли и месте человека в современном обществе» и др. [14; 4]. Как видим, тематика носит достаточно глубокий, явно мировоззренческий характер, и это еще одно подтверждение всей направленности этого предмета – способствовать формированию эстетических и духовных ценностей старшеклассников, их жизненной и нравственной зрелости.
Необходимо сказать и о предложенных Л. М. Предтеченской методах обучения старшеклассников, в числе которых «метод художественно-педагогической драматургии, игра как феномен культуры и ведущий метод преподавания искусства в школе, метод развития воображения как необходимого условия восприятия искусства, общения с ним» [13; 9]. В целом следует отметить, что это большое дело по введению в общее образование учащихся предмета, логически завершающего и обобщающего изучение искусства в общеобразовательной школе, имеет на сегодняшний день немалое количество последователей. Благодаря их усилиям, с конца 90-х годов активно идет процесс разработки программ и учебно-методических комплектов по мировой художественной культуре (см., например: Данилова Г. И. Мировая художественная культура. От истоков до XVII века. Учебник для 10 класса общеобразовательных учреждений гуманитарного профиля / Г.И. Данилова. – 2-е изд., стереотип. – М.: Дрофа, 2005; Движение мировой художественной культуры. Очерки истории: Книга для учителя, Т.3., часть 1 / Под ред. Е. П. Кабковой. – Санкт-Петербург: Питер, 2006; Кабкова Е. П., Олесина Е. П., Фомина Н. Н. и др. Мировая художественная культура: Книга для учителя старших классов общеобразовательной школы. Том 4, часть 1. – СПб.: Питер, 2007; Стукалова О.В., Олесина Е. П. и др. Мировая художественная культура. ХХ век. Литература. Том 4, часть 3. / Ред.-сост. Стукалова О. В. – М.: Питер, 2008 и др.).
Появление в 2004 году Новых государственных стандартов школьного образования имело как определѐнные преимущества, так и очевидные «потери» в отношении изучения в старшей школе предмета «Мировая художественная культура». Напомним, в соответствии с этим документом определяется максимальный объем учебной нагрузки для учащихся общеобразовательной школы, устанавливается обязательный минимум содержания образовательных программ, приводятся федеральные требования к уровню подготовки выпускников начальной, основной и средней (полной) школы. Здесь же приводятся и примерные учебные планы для каждого профиля, в числе которых представлен и художественно-эстетический профиль. Обозревая в целом примерныеучебные планы, очевидно, что лишь четвертая часть из них подразумевает гуманитарную направленность, причем, изучение мировой художественной культуры как базового учебного предмета предусмотрено в филологическом и социально-гуманитарном профиле, причем это приблизительно 3% (точнее, 2,8 %) от общего учебного времени.
В качестве профильного учебного предмета мировая художественная культура представлена соответственно только в художественно-эстетическом профиле. При сопоставлении с имеющимся опытом разработки содержания профильного обучения в 20-е годы прошлого столетия, когда обучение искусству предполагалось в общеобразовательной части, обязательной для всех циклов или направлений, в специальной части (в современном понимании изучение профильных учебных предметов) и в соответствии с характером специализации, напрашивается неутешительный вывод. Подавляющее большинство выпускников общеобразовательных школ страны, определившихся с направлением специализированной подготовки на старшей ступени школы, практически не будут иметь представлений о мировой художественной культуре.
Стоит подчеркнуть и то, что в упомянутых государственных стандартах, где даны примерные учебные планы для каждого профиля обучения, соотношение базового и профильного уровней, включая элективные курсы, варьируется, и не в пользу художественно-эстетического профиля. Так, в социально-гуманитарном профиле, собственно специализированная подготовка занимает 60% учебного времени (из расчета недельных часов за два года обучения), в филологическом – 56%, в художественно-эстетическом – 41%. Не вдаваясь в причины такого положения дел, подчеркнем следующее. Само появление данного направления специализированной подготовки в области искусства знаменательно, с другой стороны, это один из немногих предложенных примерных учебных планов, в котором не представлены профильные учебные предметы. Указывается лишь на то, что такие предметы выбираются образовательным учреждением в зависимости от направления подготовки.
Не останавливаясь подробно на предлагаемом обязательном минимуме содержания образовательных программ, а также федеральных требованиях к уровню подготовки выпускников средней (полной) школы по предмету «Мировая художественная культура» как на базовом, так и на профильном уровне, подчеркнѐм ещѐ раз главное [подробнее см.: 15]. Это цели изучения предмета, предусматривающие не только развитие, воспитание, освоение знаний и овладение определенными умениями, но и использование приобретенных знаний и умений для «расширения кругозора, осознанного формирования собственной культурной среды» [16; 415]. Именно они демонстрируют явную личностную направленность образования в старшей школе, «выход» на решение более широких задачмировоззренческого и развивающего характера, расширение общего культурного кругозора старшеклассников.
Профильный уровень стандарта среднего (полного) общего образования по мировой художественной культуре при сохранении той же структуры, значительно расширяет возможности учащихся во всех отношениях, и в первую очередь в плане «культуры восприятия произведений искусства», «закономерностей развития культурно-исторических эпох, стилей, направлений и национальных школ», «собственной эстетической оценки», «ценностях, идеалах, эстетических нормах» и др. Предлагаемый минимум содержания основных образовательных программ отражает собственно весь многовековой процесс ее развития, от происхождения искусства – до стилевого разнообразия художественной культуры конца XX – начала XXI века. Содержание включает знакомство с художественной культурой на всех этапах исторического развития человеческой цивилизации (Античность, Средние века, эпоха Возрождения, Новое время и др.), раскрывает специфику культурного наследия народов стран Азии и Африки, Востока и Западной Европы, Северной Америки и др., дает представление обо всех видах искусства в процессе их эволюции (музыка, архитектура, живопись, изобразительное искусство и др.). Особое внимание уделено отечественной художественной культуре, ее своеобразию и мировому значению, проблеме «культурного синтеза и культурного заимствования», «открытости современной русской культуры» [16; 422–423]. Упомянуты здесь проблемы диалога культур и глобализации, новых видов искусств и новых форм синтеза, преемственности русской культуры.
В целом представленный минимум содержания образовательных программ в полной мере отражает современные представления о художественной картине мира, раскрывает особенности произведений искусства различных эпох, видов, народов и стилей. Достоинством разработанного содержания основных образовательных программ следует считать и многообразие приводимых для изучения «образов культуры», что видится крайне важным для воспитания у подрастающего поколения толерантности, понимания культурных традиций различных народов России и стран мира. Так, предлагаются для постижения источники образов искусства Древнего мира, идеи древнеегипетской культуры, религиозно-мифологическая картина мира в духовной культуре народов Древнего востока, космологизм как основа китайской культуры, эстетика синтоизма в японской культуре, особенности восточно-христианского мировосприятия и др. Интересен тот факт, что в разработанном минимуме содержания 2004 года имеется раздел, посвященный происхождению искусства. Стоит напомнить о таком же разделе в программе по Истории культуры, разработанной Оренбургско-Тургайским Губернским Отделом Народного Образования [2; 184–216]. В наличии такого необходимого, на наш взгляд, раздела, усматривается попытка приблизить современных школьников к пониманию специфики художественного наследия человечества, постижению его особого значения как одной из форм общественного сознания, осознанию всеобщности языка художественной культуры.
В стандартах, нередко называемых стандартами первого поколения, найдено гибкое сочетание различных видов искусства, архитектуры и скульптуры, музыки и изобразительного искусства, литературы и театра, кинематографа и телевидения. Присутствуют и новые виды искусств, например, компьютерная графика и анимация, высокая мода, инсталляция и др., что поможет старшеклассниками сориентироваться в художественном многообразии мир. Требования к подготовке выпускников, изучающих мировую художественную культуру на профильном уровне, усложнены, и в большей степени ориентированы на умение сравнивать стили и соотносить их с различными историческими эпохами, национальными школами и др., аргументировать собственное мнение в дискуссиях по проблемам художественной культуры, понимать специальные искусствоведческие термины, выполнять разнообразные учебно-творческие задания и др. Как требование к уровню подготовки заявлено и профессиональное самоопределение старшеклассников в сочетании с собственной траекторией своего культурного развития.
В целом можно говорить о том, что разработанный стандарт 2004 года среднего (полного) общего образования по мировой художественной культуре направлен на обобщение знаний по предметам искусства в объеме начальной и основной школы, обеспечивает сохранение преемственности в изучении музыки и изобразительного искусства на разных ступенях общего образования. Заметим ещѐ раз, что это касается только тех молодых людей, выпускников общеобразовательных школ, которые выберут филологический, художественно-эстетический, социально-гуманитарный или универсальный профиль обучения. Реальность же в отношении предмета «Мировая художественная культура» на уровне проекта Федеральных государственных образовательных стандартов второго поколения для старшей школы неутешительна. Этот курс предлагается для изучения по выбору (то есть не является обязательным), что, на наш взгляд, имеет далеко идущие и необратимые последствия, главное из которых – отторжение отечественной и мировой культуры от подавляющего большинства современной молодѐжи, и как следствие, непонимание молодым поколением своей роли в сохранении и воспроизводстве культурных традиций.
Кроме того, такой предмет органично завершает изучение искусства в школе, и его отсутствие на завершающей ступени общего образования лишает практически всех
юношей и девушек возможности познакомиться с существующим многообразием художественного творчества, осмыслить всемирное духовное наследие непреходящей значимости. Для современного молодого человека предмет «Мировая художественная культура – это и «прикосновение» к эстетическим идеалам и художественным ценностям, творческим свершениям гениев разных эпох, словом приобщение к тому, что на протяжении тысячелетий составляло духовный опыт человека и в специфической форме «высвечивало» эталон образа жизни для всего человечества. «Потеря» этого предмета как обязательного для изучения на завершающей ступени школы оборачивается и своей другой стороной. Имеющийся отечественный опыт изучения этого предмета убедительно показал — освоение отечественной и мировой художественной культуры выступает для старшеклассников способом самопознания, одной из форм освоения окружающей художественной действительности, где с особой силой проявляется мера истинной культуры в единичном (отдельно взятой личности) и всеобщем (коллективном).
И последнее. В современном образовательном пространстве школы предмет «Мировая художественная культура» (наряду с литературой, которую, кстати, в обсуждаемом проекте ФГОС тоже предлагается изучать по выбору) является практически единственной возможностью приобщения старшеклассников к сфере духовной жизни общества. К сожалению, проект образовательных стандартов второго поколения среднего (полного) общего образования не учитывает имеющийся отечественный опыт: именно «Мировая художественная культура» как учебный предмет способствует формированию у школьников основ художественного мышления, что позитивно сказывается в целом на развитии у молодѐжи способности думать, ставить и осознавать проблемы, находить пути их разрешения, осуществлять необходимые при этом действия и делать соответствующие выводы. Но, главное, потенциал мировой художественной культуры может в полной мере обеспечить и качественно новый уровень образования на старшей ступени общеобразовательной школы. И это проявит себя во взаимодействии учащихся с окружающим миром (социализации), согласованности между убеждениями и различными аспектами деятельности (воспитанности), сформированности у юношей и девушек истинно человеческих качеств: любви и доверия к людям, трудолюбия и самостоятельности, этических принципов, стремления к знаниям – творческого самообразования и саморазвития.
Литература
1. Константинов Н.А. Очерки по истории средней школы. 2-е изд., доп. – М.: Уч.-пед.Изд. – 1956. — 247 с.
2. Примерные программы для второй ступени Единой трудовой школы (Утверждены Наркомпросом РСФСР). – Издание Оренбургско-Тургайского Губернского Отдела Народного Образования – Оренбург: Типография Г.М. Мильберг, 1921. – 224 с.
3. Программа семилетней трудовой школы. Для школ Рославльского уезда. – Рославль, 1922. – 93 с.
4. Программы школ первой и второй ступени. Сост. школьн. работн. г. Владивостока под ред. Приморского Губернского Отдела Народного Образования. – Владивосток: Госкнига, 1923. – 280 с.
5. Научные школы в педагогике искусства: Монография. Часть I. – М.: Издательский Дом РАО, 2008. – 166 с.
6. Кабкова Е.П., Савенкова Л.Г. Эффективные системы взаимодействия предметов гуманитарного цикла в практике общеобразовательных учреждений: Монография. – М.: ИХО РАО; Тольятти: ТГУ, 2005. – 235 с.
7. Программы-минимум Единой трудовой школы первой и второй ступени. – Л.: Кн. сектор ЛГОНО, 1925. – Выпуск 2. Изобразительная грамота, драматизация и музыка в трудовой школе первой и второй ступени. – 1925. – 68 с.
8. Повышенная школа и оборона страны. Сборник материалов, дополнений и пояснений к программам Наркомпроса. – М. – Л.: НКП РСФСР — Госиздат, 1-е изд.1927. – 151 с., 2-е изд. 1929. – 151 с., 3-е изд. – 1930. – 151 с.
9. Директивы ВКП (б) и Постановления Советского Правительства о народном образовании. Сборник документов за 1917 – 1947 гг. Приложение к журналу «Советская педагогика». Вып.1, сост. Н.И.Болдырев.– М. – Л.: АПН РСФСР, 1949. – 320 с.
10. Сборник руководящих и инструктивных материалов по всеобщему обучению детей. – М.: Наркомпрос РСФСР, 1944. – 96 с.
11. Народное образование в СССР. Общеобразовательная школа. Сборник документов. 1917 – 1973 гг. Сост. А.А.Абакумов, Н.П. Кузин, Ф.И. Пузырев, Л.Ф. Литвинов. – М.: Педагогика, 1974. – 560 с.
12. Мировая художественная культура. Программа экспериментальных курсов для общеобразовательной школы (VIII – X классы) (с краткими методическими рекомендациями). – М.: НИИ школ, 1983. – 144 с.
13. Предтеченская Л.М. Мировая художественная культура – пути становления предмета // Искусство в школе, № 1. 1992. – С. 3 -10.
14. Мировая художественная культура. Программа для общеобразовательной школы VIII — X (IX – XI) классов (с краткими методическими рекомендациями). – М.: НИИ школ, 1987. – 92 с.
15. Алексеева Л.Л. Государственные образовательные стандарты общего образования и предметы искусства // Педагогика искусства: электронный научный журнал. — № 2, 2010, URL: http://www.art-education.ru/AE-magazine/.
16. Новые государственные стандарты школьного образования. – М.: ООО «Издательство Астрель»: ООО «Издательство АСТ», 2004. – 446 с. – (Образование в документах и комментариях).

Мировая художественная культура

В целях отбора для обучения в университете по направлению 031500 Искусствоведение (история искусств) наиболее подготовленных и творчески одарённых абитуриентов вводится дополнительное вступительное испытание профессиональной направленности – экзамен по дисциплине «Мировая художественная культура».

Настоящее Положение разработано в соответствии с Программой «Мировая художественная культура», составленной на основе федерального компонента Государственного стандарта среднего (полного) общего образования на базовом уровне.

Цели и задачи дополнительного вступительного испытания:

1) определение уровня знаний абитуриентов в области истории и основ теории искусства, понимания природы и языка искусства;

2) выявление эрудиции, круга интересов, способностей абитуриентов к восприятию основных проблем в области изучения истории и теории искусства, к осуществлению будущей профессиональной деятельности.

Дополнительное вступительное испытание проходят абитуриенты, поступающие для обучения по направлению 031500 Искусствоведение (история искусств).

Дополнительное вступительное испытание включает в себя:

1) тестирование общего уровня гуманитарного развития и выявление знаний в рамках школьного курса «Мировая художественная культура»;

2) собеседование с членами комиссии из преподавателей профилирующей кафедры по выявлению творческих способностей, общей эрудиции в вопросах понимания произведений искусства и обоснованности выбора профессии искусствоведа.

Тестирование включает вопросы, курса мировой художественной культуры, который систематизирует знания о культуре и искусстве, полученные в образовательных учреждениях, реализующих программы начального и основного общего образования на уроках изобразительного искусства, музыки, литературы и истории, формирует целостное представление о мировой художественной культуре, логике её развития в исторической перспективе, о её месте в жизни общества и каждого человека. Принимая во внимание специфику предмета, его непосредственный выход на творческую составляющую человеческой деятельности, в курсе упор сделан на развитие восприятия и интерпретаторских способностей учащихся на основе их личного эмоционального, эстетического и социокультурного опыта и усвоения ими элементарных приёмов анализа произведений искусства.

В содержательном плане курс мировой художественной культуры следует логике исторической линейности (от культуры первобытного мира до культуры ХХ века) и строится на принципах выделения культурных доминант эпохи, стиля, национальной школы. На примере одного–двух произведений или комплексов показываются характерные черты целых эпох и культурных ареалов. Отечественная (русская) культура рассматривается в неразрывной связи с культурой мировой, что даёт возможность по достоинству оценить её масштаб и общекультурную значимость.

В результате изучения мировой художественной культуры в рамках школьного курса абитуриент должен:

Знать / понимать:

  • основные виды и жанры искусства;
  • изученные направления и стили мировой художественной культуры;
  • шедевры мировой художественной культуры;
  • особенности языка различных видов искусства.

Уметь:

  • узнавать изученные произведения и соотносить их с определенной эпохой, стилем, направлением.
  • пользоваться различными источниками информации о мировой художественной культуре;
  • выражать собственное суждение о произведениях классики и современного искусства.

Порядок проведения экзамена по дисциплине «Мировая художественная культура».

Тестирование осуществляется на основе подготовленных вопросов в соответствии с Программой курса «Мировая художественная культура». Тест состоит из вопросов по истории и основам теории искусства. К каждому вопросу предложено 3–4 ответа, один из которых является правильным и дает абитуриенту 2 или 3 балла. Всего в результате тестирования абитуриент может набрать 80 баллов. Время на выполнение теста – 1,5 астрономического часа (без перерыва).

Собеседование проводится сразу после тестирования. Члены предметной комиссии беседуют с ним по вопросам, проясняющим творческие способности, общую эрудицию в вопросах понимания произведений искусства, обоснованность выбора профессии искусствоведа. В результате собеседования максимально абитуриент может набрать еще 20 баллов.

Подведение итогов дополнительного испытания проводится после его прохождения всеми претендентами и объявляется по завершении.

В целом результаты экзамена оцениваются в пределах 100 баллов.

ХУДОЖЕСТВЕННАЯ КУЛЬТУРА — это… Что такое ХУДОЖЕСТВЕННАЯ КУЛЬТУРА?

        одна из специализированных сфер культуры, функционально ре-шающая задачи интеллект.-чувственного отображения бытия в худож. образах, а также различных аспектов обеспечения этой деятельности.         Изучением Х.к. традиционно занимались филосо-фия и эстетика (как раздел философии), истор. науки, иск-ведение и лит-ведение. При этом Х.к. рассматрива-лась в основном как совокупность нескольких видов искусства, к-рые исследовались в онтологич., генетич., историко-хронологич., формально-стилевом, художественно-технол. и иных «внутрихудож.» ракурсах по-знания. Осн. акцент делался преимущественно на ана-лизе духовно-мировоззренч. и творч. проблем искусст-ва, на худож. качестве произведений и проф. мастерстве их авторов, на психологии творчества, восприятия и интерпретации худож. образов. Более или менее цело-стное представление об искусстве формировалось в осн. эстетикой (философией искусства) в ракурсе осмысле-ния сущности прекрасного и творчества как способа его выражения. Внетворч. аспекты Х.к. (социал., функци-ональные, коммуникативные и пр.), так же, как и ее место в системе культуры в целом, при этом почти не затрагивались или анализировались только с позиций «духовного производства», противопоставляемого мате-риальному. Существ, сдвиг в научном понимании Х.к. произошел с зарождением семиотики и семантики культуры, интерпретировавших всю совокупность объектов Х.к. как систему смыслонесущих текстов, а феномен худож. образа как специфич. тип семантемы, несущей социально значимую информацию. Это позво-лило перейти от чисто субъективных, качественных (в существ, мере художественно-критич.) оценок явлений искусства к более объективированным научным иссле-дованиям признаков и параметров Х.к. Со своей сторо-ны серьезный вклад в объективизацию подходов к изу-чению Х.к. внесла антропология, рассматривавшая воп-росы генезиса и социальных функций худож. деятель-ности у архаич. сооб-в. В последние десятилетия появи-лись также работы по социологии искусства и Х.к. (в первую очередь массовой Х.к.), существенно расширив-шие ракурс понимания этого феномена в его социаль-но-интегративных и регулятивных функциях. С культурологич. позиций Х.к. структурно включа-ет в себя подсистемы: собственно худож. творчества (как индивидуального, так и группового); его организа-ционной инфраструктуры (творч. ассоциации и органи-зации по размещению заказов и реализации худож. продукции); его материальной инфраструктуры (произ-водств. и демонстрационные площадки); худож. образо-вания и повышения квалификации (включая практику творч. конкурсов); организованной рефлексии процес-сов и рез-тов худож. творчества (худож. критика и прес-са, разл. области научного искусствознания); эстетич. воспитания и просвещения (совокупность средств сти-мулирования интереса населения к искусству); рестав-рации и сохранения худож. наследия; техн. эстетики и дизайна (художественно оформленной продукции ути-литарного предназначения); художественно-творч. са-модеятельности населения; гос. политики в области Х.к. и ряд иных подсистем более частного порядка.         Содержат, ядро Х.к. — искусство (включая худож. лит-ру) как один из важнейших механизмов познания феномена человека и окружающего его мира, аккумуля-ции этого знания и социального опыта людей (прежде всего нравств. аспекта их взаимодействий), порождения и селекции специфич. ценностных установок индивид. и коллективного бытия людей и актуализации этих ценностей путем опредмечивания их в худож. образах. Худож. образы при этом построены на вербальной, изобразит., звуковой или пластич. имитации наблюда-емых или представляемых объектов, процессов, колли-зий,ощущений и т.п. с целью проектирования неких эталонных образцов нормативного сознания и поведе-ния (нередко подаваемых в контрасте с их антиподами), имеющих в конечном счете дидактич. предназначение, а также стимулирование с позиций этих ценностных эталонов соответствующей социальной практики людей.         Фактически искусство проектирует мир вообража-емых реалий (или наблюдаемых, но подвергнутых субъективной авторской интерпретации), выстроенных т. о., чтобы акцентировать внимание людей на тех нравств., этич., эстетич. и иных проблемах, к-рые акту-ализируются в данном произведении. При этом подни-маемые проблемы подаются в яркой, эмоционально окрашенной форме, инициируя ответное эмоц. пере-живание зрителя, читателя, слушателя, его осознанное или латентное соотнесение самого себя с предметом переживания, и при этом «обучают» его на этом приме-ре, вызывают в нем стремление к подражанию полю-бившимся ему образам и образцам (т.е. рекомендуемым эталонам). В отличие от других форм познания мира, аналитически расчленяющих его на отд. познаваемые сегменты и объекты, искусство стремится к познанию и образному отображению действительности в ее целос-тном, синтезированном виде посредством создания ее комплексных моделей со специфически расставленны-ми акцентами противопоставления позитивного начала (способствующего консолидации и взаимопониманию людей) негативному (ведущему в конечном счете к со-циальной деструкции и разобщению людей).         Социокультурные функции искусства и Х.к. в целом в значит, мере связаны, во-первых, с нравств. осмыслением и обобщением социального опыта людей и формиро-ванием на основе этого эталонных образцов ценностно-нормативного поведения и образов сознания, воплощае-мых в худож. образах. В этой функции Х.к. коррелирует с религией и философией, хотя и реализует подобные зада-чи своим специфич. способом. Во-вторых, с задачами со-циализации и инкультурации личности, введения ее в ак-туальную для сооб-ва систему нравств. и эстетич. ценно-стей, моделей поведения и рефлективных позиций, в обобщенный в нравств. аспекте реальный социальный опыт человеч. взаимодействия, а также в искусственно конструированный нравств. опыт, выстроенный на осно-ве придуманных образов и жизненных коллизий. Это ве-дет к существ, расширению общего объема такого рода опыта, осваиваемого людьми, увеличению числа показат. примеров, рекомендуемых культурных образцов. Такого рода функция превращает искусство в один из важнейших инструментов социальной регуляции жизни общ-ва, ведет к включению его элементов в работу механизмов воздей-ствия на сознание людей, отличающихся наиболее массо-вым распространением (в системы массового образова-ния, средств массовой информации, в инструментарий полит, агитации и пропаганды и т.п.). И в-третьих, важ-нейшей функцией Х.к. является задача проектирования эстетически организованной (в пространств., декоратив-ном, интеллект., эмоц. и иных аспектах) среды обитания людей, насыщенной эталонными образцами порожден-ных искусством художественно-культурных ценностей. Эта функция тесно связывает искусство со сферой мате-риального производства и строительства, на стыке с к-рыми существуют дизайн, декоративно-прикладное твор-чество, архитектура и монументальные жанры изобразит. искусства.         И ценностно-социализирующая, и средоорганизующая функции Х.к. были заложены уже в самом истор. происхождении этого явления. В этой связи необходи-мо отметить, что худож. деятельность (генерирующая ценности в образном выражении) и искусство (творче-ство и мастерство) имеют разл. генезис, специфика к-рого в большой мере определила осн. характеристики Х.к. как целостности. Худож. деятельность зародилась еще в верхнем палеолите (40 тыс. лет тому назад) как элемент магико-ритуальной религ. практики (изобра-зит. и динамич. имитация способов и объектов охоты, символика культа детородных функций женщин и т.п.), из разного рода этикетных церемоний и способов обу-чения молодежи практич. навыкам охотничьей и иной социальной жизнедеятельности (в устной и демонстрац. формах, превращавшихся также в обрядовые действия). Так или иначе, но речь шла прежде всего о разл. имита-ционно-игровых формах поведения или изобразит, фик-саций их значимых сущностей. И на протяжении почти всей истории человечества вплоть до конца средневековья худож. деятельность являлась преимущественно отраслью, «обслуживавшей» религ., полит., образоват. и иные соци-альные функции, выделившись в самостоят, сферу дея-тельности лишь к началу Нового времени. Даже эпоха ан-тичности не являлась в этом смысле исключением, хотя особенный антропоморфный характер античных религий и их атрибутики порождает иллюзию о преобладании светских черт в Х.к. того времени.         Искусство же как особый тип деятельности, отличаю-щейся творчески-инновативным методом производства продукции, повышенным мастерством исполнения и вы-раженными индивидуально-авторскими чертами каждого продукта, являющегося по определению уникальным, не подлежащим вариативному воспроизводству произведе-нием, родилось преимущественно из ремесла в эпоху ста-новления городских цивилизаций в 4-3 тыс. до н.э. С на-чалом социального расслоения об-ва, с появлением кате-гории социальной престижности и заказчиков, готовых из соображений этой престижности оплатить изготовление для них предметов потребления, отличающихся повы-шенным качеством, красотой и иными уникальными ха-рактеристиками, выделился и особый вид ремесленного производства по дорогому индивидуальному заказу с ха-рактерными признаками авторского стиля исполнителя. Процесс постепенного сближения и слияния этой ремес-ленной, декоративно-прикладной деятельности с практи-кой собственно худож. длился на протяжении многих ве-ков, пока не образовался тот синтез худож. образа и ре-месла (мастерства!) его исполнения, к-рое называется ис-кусством в совр. понимании этого слова.         Хотя Х.к. и отличается творчески-инновативным подходом к образному моделированию действительно-сти, она является тем не менее высоконормативной сферой деятельности, постоянно регулируемой эстетич. предпочтениями «социального заказа»» (в т.ч. худож. модой), выраженными в актуальных суждениях худож. критики и доминирующем худож. стиле; рынком практич. спроса на тех или иных авторов, исполнителей, жанры, произведения и пр.; внутрипроф. критериями качества и мастерства, специфич. технологиями работы с материалом и принципами формирования худож. об-разов, основанными на исторически сложившихся тра-дициях (академизм), воспроизводимыми прежде всего «классич.» худож. образованием, определяемыми на творч. конкурсах, и пр.; философией искусства, форму-лирующей его осн. эстетич. категории, и т.п.         Х.к. — одна из наиболее динамичных в изменчиво-сти своих форм областей культурной практики, чутко реагирующей на малейшие изменения социальных, экон., полит, и иных условий жизни сооб-ва и связан-ных с ними колебаний «социального заказа» и рынка спроса на ту или иную худож. продукцию. Будучи од-ним из наиболее новаторских направлений в области форм создаваемой продукции, Х.к. одновременно оста-ется и одной из наиболее традиц. сфер культуры в воп-росах социально-нравств. содержания произведений, ориентированных на «вечные ценности» человеч. бы-тия, связанных с устойчивостью осн. антропол. и соци-альных интересов людей и вытекающих из этого нравств. проблем их межличностного взаимодействия, что выра-жается в искусстве в такого же рода устойчивости боль-шого числа «типовых» фабульных коллизий, «кочую-щих» сюжетов, «вечных» образов и тем.         Как и иные специализир. области культуры, Х.к. соци-ально стратифицирована. Ее первонач. разделение на проф. и народное (фольклорное) искусство со временем дополнилось выделением еще более узких зон худож. практики: религ., аристократич. (элитарной), детской (для детей), военной (для военных), тюремной (силами самих заключенных) и пр. С сер. 19 в. развивается и такое своеобр. явление, как массовая Х.к., в к-рой на вполне проф. уровне худож. мастерства излагается упрощенное, инфантилизированное смысловое содержание, а худож. образы и формы редуцируются к интеллект, и эстетич. уровню самого непритязат. потребителя.         Если на протяжении большей части своей истории Х.к. представляла собой сферу преимущественно инди-вид. творч. усилий, где художник помимо собственно проф. задач сам решал все организац., техн. и иные про-блемы (у крупных мастеров ситуация несколько облегча-лась наличием учеников, на к-рых возлагались разл. под-собные функции), то в течение Нового и новейшего вре-мени Х.к. постепенно превратилась в развитую индуст-рию изготовления худож. продукции, обеспечение и реа-лизацию к-рой приняли на себя многочисл. служебные подсистемы Х.к., по своему техн. оснащению ныне явля-ющейся одним из наиболее наукоемких производств.         Следует заметить, что Х.к. при любых типах об-ществ. устройства всегда существовала преимуществен-но по законам свободного рынка, развиваясь в услови-ях жесткой творч. конкуренции и «продавая» свою про-дукцию, как правило, по ценам, регулируемым объек-тивным уровнем спроса. Вместе с тем практически во все времена и во всех сооб-вах светские и церковные власти пытались управлять и манипулировать в своих интересах содержанием и формами худож. творчества, прекрасно понимая исключит, идейно-пропагандистскую эффективность воздействия искусства на сознание и психику людей. Проблема взаимоотношений худож-ника и власти всегда была высокоактуальной в культу-рах многих народов и порождала феномен «андеграундного» искусства, не признаваемого властями и домини-рующими обществ, предпочтениями.         Совр. Х.к. постиндустр. стран одна из наиболее раз-витых и высокодоходных индустрий социальных услуг. При очевидном затухании традиций народного фольк-лорного искусства (или, точнее, перемещения практи-ки непроф. худож. творчества из сельской в городскую социальную среду и постепенного слияния этого явле-ния с элементами городской массовой культуры) в Х.к. в целом наметилась тенденция изменения принципа ее внутр. дифференцированности от социально обуслов-ленных жанров к иерархии уровней коммерч. рента-бельности тех или иных худож. феноменов (как «высо-кого», так и «низкого» жанров). Подобное социальное переструктурирование Х.к. связано прежде всего с фор-мированием нац. Х.к. — явления, не встречавшегося в доиндустр. эпоху. Х.к. характерна прежде всего отсут-ствием выраженных границ социальной стратифициро-ванное(tm) субкультурных явлений, опр. уровнем худож. эрудированности и приобщенности к нац. худож. ценностям практически всех членов сооб-ва, что в конеч-ном счете повышает эффективность социально-интегративной функциональности Х.к. Существ, роль в этом процессе играют средства массового репродуцирования и тиражирования произведений искусства и их дистан-ционная трансляция электронными СМИ.         В целом, хотя в культурной жизни постиндустриаль-ных стран в последние десятилетия наблюдается опережа-ющее развитие явлений массовой Х.к. как наиболее рен-табельной с т. зр. потребит, спроса,»классич.» направле-ния Х.к. остаются вполне актуальной областью культур-ной практики и выполняют свои ценностно-креативные, социализирующие и инкультурирующие функции в пол-ном объеме, соответствующем объективным социальным потребностям сооб-в; рассуждения же о кризисе «клас-сич.» жанров Х.к. представляются малообоснованными.

Лит.: Худож. культура в докапиталистич. формациях. Л., 1984; Худож. культура в капиталистич. об-ве. Л., 1986; Художественная культура и гуманизация образования. СПб., 1992; Худож. культура и народное творчество. М., 1994; Худож. культура и просвещение России XX века. Екатеринбург, 1995; Худож. культура русской усадьбы. М.. 1995; Каган М.С. Философия культуры. СПб., 1996.

А.Я. Флиер

Культурология. XX век. Энциклопедия. 1998.

Мировая художественная культура в российском образовании (от периода «Оттепели» до современности) Текст научной статьи по специальности «Искусствоведение»

ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ ОПЫТ

УДК 008:37 ББК 71.063

В.В. Бабияк, Л.М. Мосолова

мировая художественная культура в российском образовании (от периода «оттепели» до современности)

Рассматривается эволюция дисциплины «мировая художественная культура» в российском образовании в контексте динамики культуры в период с 1960-х гг. до настоящего времени. Даётся обзор историко-культурной обстановки в стране со времени ренессан-сных процессов в культуре периода хрущевской «оттепели» 1970-1980-х гг. — с появлением новой педагогики искусства, понимающей его важность в становлении духовной культуры общества. «Культурологический поворот» 1980-1990-х гг. содействовал междисциплинарному взаимодействию наук, положив начало разработке школьных и вузовских программ по мировой художественной культуре, определивших стратегию влияния различных искусств на формирование молодой личности. В конце 1990-х гг. становится актуальной идея ликвидации разрыва между школой и культурой, создание регионально-этнических версий художественной культуры. В 2000-е гг. произошел поворот в сторону административного регулирования деятельности высшей и средней школы, их стандартизации, приведшей к серьезному ослаблению образовательной и воспитательной роли мировой художественной культуры. В статье вскрываются причины этого явления, подчеркивается необходимость разработки концепции образования как социокультурного развития российской нации, определения ее ценностных ориентиров, формирования нового культурно-образовательного пространства страны.

Ключевые слова:

динамика культуры, культурный контекст, мировая художественная культура, образование, типология культуры.

Бабияк В.В., Мосолова Л.М. Мировая художественная культура в российском образовании (от периода «оттепели» до современности) // Общество. Среда. Развитие. — 2015, № 4. — С. 128-131.

© Бабияк Вячеслав Вячеславович — доктор искусствоведения, профессор, Российский государственный педагогический университет им. А.И. Герцена, Санкт-Петербург; e-mail: [email protected] © Мосолова Любовь Михайловна — доктор искусствоведения, профессор, зав. кафедрой теории и истории культуры, Российский государственный педагогический университет им. А.И. Герцена, Санкт-Петербург; e-mail: [email protected]

Один из наиболее крупных исследователей отечественной художественной культуры Николай Андреевич Хренов очень точно определил эпоху хрущевской «оттепели» в качестве «исходной точки надлома советской империи» [12, с. 15]. Различая историю государства и историю цивилизации, он показал, что этот период вовсе не был чем-то вроде кризиса или тупика искусства. По его мнению, «именно этот период позволяет говорить о чем-то таком, что, как это не кажется странным, можно было бы обозначить как ренессанс искусства, или имперский ренессанс искусства» [12, с. 36].

Действительно, с эпохи «оттепели» появилось множество ярких деятелей искусства и культуры, чье творчество обрело значительный общественный резонанс и

всенародное признание. Н.А. Хренов приводит почти полсотни имен писателей, музыкантов, композиторов и художников, занимавшихся философско-культурным осмыслением художественного творчества. В сфере философии искусства и культурологической мысли с начала эпохи «оттепели» ярко высвечивались труды С. Аверин-цева, Д. Лихачева, М. Бахтина, А. Меня, Ю. Лотмана, М. Мамардашвили и, добавим, Э. Маркаряна, М. Кагана, М. Германа.

Нужно отметить, что к ренессансным процессам, происходившим в культуре рассматриваемого времени, следует отнести процессы обновления художественного образования в средней школе, в педагогических университетах, вузах культуры и искусства и других образовательных учреж-

дениях. С периода хрущевской «оттепели» стало вызревать понимание самоценности личности в социальном и культурном творчестве. Тогда появился новый девиз школьного образования: «Вернуть ребенка школе!». «Шестидесятники» пробудили живую энергию общественной мысли о необходимости изменения образования, которая смогла преодолеть сопротивление консерваторов даже в последующую эпоху «застоя». Вполне закономерно, что в такой ситуации возник интерес и особое внимание к роли искусства в образовании детей.

К концу 70-х и в 80-е годы стала бурно развиваться инновационная деятельность педагогов-практиков в сфере освоения искусства школьниками. В этом направлении огромное значение имели инициатива и упорная работа Дмитрия Кабалевского, Бориса Неменского, Бориса Юсова, Ролана Быкова, Сергея Герасимова. Самым главным в деятельности этих педагогов становилось понимание искусства как способа самореализации ребенка в процессе его вхождения в мир культуры, понимание преобразующей силы искусства, способствующей становлению духовной культуры ребенка, подростка, юноши. Появилась новая педагогика искусства, потребовавшая творчества учителя как культуролога искусства. Ее основные идеи исчерпывающе изложены в одноименной работе Б.М. Неменского. Позднее он уточнял, что такой учитель «должен не только владеть всеми видами и техниками практической деятельности, но и уметь раскрыть детям духовную, эмоциональную, отношенческую суть художественных занятий как на примере взрослого искусства, так и на примере собственного наивного детского творчества» [5, с. 80].

В лаборатории Д. Кабалевского стали разрабатывать первые варианты школьной программы по мировой художественной культуре. Руководила их разработкой Л.М. Предтеченская. Программа была нацелена на использование силы воздействия разных искусств в их комплексе для формирования личности старшеклассника, его идейно-нравственных убеждений, эстетической воспитанности, составляющих основу мировоззрения и жизненной позиции. Введение предмета «мировая художественная культура» (МХК) в средних школах в конце 80-х — 90-е годы проходило относительно успешно.

Вместе с тем нам представляется, что тенденции обновления художественного образования и введение предмета «мировая художественная культура» в средней и высшей школе в решающей степени были связаны с «культурологическим поворотом»

в философии, эстетике, филологии, истории и социологии, с ясно проявившейся тенденцией к междисциплинарному взаимодействию разных наук, исследующих человеческий опыт. Формирование культурологии искусства в немалой степени было вызвано и запросами самой культурологии. Целостное представление о культуре предполагало познание такой ее существенной части, как мир искусства, или искусство сфера культуры.

Кроме того, появление культурологии искусства было продиктовано запросами искусствоведческих наук, узкая специализация которых в изучении архитектуры и литературы, музыки и живописи, скульптуры и театра, дизайна и кино приводила «к все более острому ощущению недостаточности разрозненно-односторонних подходов к многосторонне целостному процессу художественного развития человечества», — отмечал тогда философ и культуролог М.С. Каган [13, с. 3].

Отвечая на вызовы времени, коллектив кафедры теории и истории мировой художественной культуры Герценовского университета создал фундаментальные программы и учебные пособия для системы подготовки преподавателей «мировой художественной культуры». Они были высоко оценены и освоены многими вузами России [см., например, 3; 4; 8].

Большую деятельность в направлении междисциплинарного исследования искусства развернул в 80-е годы Научный совет Академии наук СССР на базе секции теоретических проблем культуры. Члены секции работали в рамках реализации комплексной программы «История мировой культуры», руководимой директором Государственного Эрмитажа Б.Б. Пиотровским. Среди научных мероприятий, проводимых этим советом, следует выделить симпозиум 1987 года, посвященный изучению места искусства в системе культуры, его взаимосвязям с другими сферами культуры. По материалам этого симпозиума был опубликован сборник, инновационный для того времени по своему научному содержанию, «Искусство в системе культуры» [1, с. 156]. Авторами статей в этом сборнике были в основном профессионалы высокого класса: Э.С. Маркарян, М.С. Каган, Л.Н. Столович, В.Е. Гусев, Н.А. Хренов, Б.М. Бернштейн, Т.А. Славина и ряд других. В сущности, здесь были изложены теоретические основы культурологии искусства.

Культурологическое осмысление всей искусствосферы как целостности, ее особой позиции в культуре и культурах, понимание искусства как «зеркала», «кода»,

3 ю О

«самосознания» культуры имело поразительный пусковой эффект для развертывания масштабной деятельности в ин-тегративном изучении сферы искусства и развитии художественного образования. Курсы мировой художественной культуры стали широко вводиться в университетах и средних школах страны.

В указанном сборнике статья «Развитие и функционирование зрелищных форм в контексте культуры» была написана Н.А. Хреновым.. Показательны в данной статье некоторые важные методологические основания. Под «культурой» Н.А. Хренов подразумевал «всю совокупность сформировавшихся в процессе жизни и деятельности общества внебиологических программ и образцов человеческого поведения» [11, с. 157]. Вместе с Э.С. Маркаряном и М.С. Каганом он применил деятельнос-тный подход к изучению художественной культуры. Важно также, что Н.А. Хренов акцентировал внимание на понимании культуры как программы деятельности человека. Впоследствии эта тема была специально разработана В.С. Стёпиным в его известных работах о кодирующих системах общества, социокодах, в которых аналогом генетических кодов выступает культура [см., например, 9]. Существенно также, что, рассматривая культурологический подход при определении места того или иного вида искусства в общей системе искусств, Хренов подчеркивал необходимость «учитывать особенности времени культуры, которое отличается от ритмов развития общества» [1, с. 157]. Наконец, в этой статье он указал на то, что зрелищные формы искусства далее в новом характере их взаимодействия с массовой публикой окажутся в центре художественной культуры [1, с. 157]. Данные теоретические положения способствовали углублению методологии изучения художественной культуры [см., например, 10].

Одной из важных идей, способствующих внедрению интегративного курса мировой художественной культуры в образование с конца 90-х годов до рубежа XX-XXI веков, стала идея преодоления разрыва между школой и культурой, возвращение языков и культур всем народам страны, создание регионально-этнических версий художественной культуры. В это время возник интерес к проблеме культуросооб-разности образования, известной еще со времен К.Д. Ушинского, но наполнившейся новым содержанием. В частности, речь шла о необходимости вести обучающуюся молодежь к самоопределению, самореализации в сложном многокультурном мире,

включать в личностный арсенал школьника и студента способность к диалогу и толерантности. Речь шла также о том, чтобы векторы культуросообразности были конкретизированы для каждой подсистемы образования и всех ее уровней в общенациональном и региональном контекстах.

К сожалению, многие культурологические проблемы образования остались нерешенными. Первое десятилетие XXI века ознаменовалось процессами реанимации административного регулирования всех сторон деятельности высшей и средней школы, ограничивающего возможности более продуманного, адекватного времени и свободного развития образования. В эти годы усилилась его стандартизация удивительно переменчивого и легковесного характера, что вело не к улучшению качества обучения и воспитания, а к ухудшению. За последнее десятилетие курс МХК стал терять свои позиции в высшем и среднем образовании.

Ослабление и убывание занятий по мировой художественной культуре связано не только с внешними социальными обстоятельствами. Есть целый ряд внутренних причин, обусловивших кризисное состояние дисциплины в современном образовании.

Если говорить о школьном предмете МХК, программы которого базировались на разработках Л.М. Предтеченской и ее команды, то с самого начала не были включены теоретические основания по культурологии искусства, которые подготовили Э.С. Маркарян, М.С. Каган, Н.А. Хренов и герценовские единомышленники. Ни один учебник по МХК не содержит сколько-нибудь внятного культурологического пред-послания; постоянно культивировалась только историко-феноменологическая база вместо серьезных обобщений в рамках исторической культурологии и попыток осмыслить явления искусства как феномен конкретной культуры. Несмотря на имеющуюся разработку системного и целостного подходов к изучению искусства сферы культуры, в преподавании курса МХК практиковался «комплексный подход», в рамках которого механически объединенные виды искусства так и брели по «отдельным коридорам», не взаимодействуя в контексте породившей их культуры. Программы изучения явлений художественной культуры строились на перечислении и описании «самых лучших произведений» и характеристик художественных стилей, поэтому курс превратился в «шедевриаду».

В содержании рассматриваемого предмета до сих пор отсутствует главная куль-

турно-антропологическая установка — образы человека в культурно-историческом творчестве людей, наследование и обновление человеческого опыта в его ценностно-смысловом единстве и разнообразии. Кроме того, в содержании этого курса преобладали европоцентристские установки, а художественная культура России была представлена фрагментарно, не говоря уже о других народах Востока, юга, да и народах нашей страны.

По настоящему полноценно и глубоко не разработан курс по теории и методике преподавания мировой художественной культуры и других культурологических предметов; культурологический анализ явлений искусства вызывает большие трудности.

Сложно в это поверить, но даже масса учителей, а не только чиновников не имеет адекватного научного понимания самого феномена культуры. В системах повышения квалификации учителей МХК в постдипломном формате мало компетентных в культурологическом отношении преподавателей.

Следует отметить, что в учебных планах петербургских университетов по подготовке культурологов, в том числе учителей культурологии, во второй половине 90-х годов дисциплина «мировая художественная культура» являлась базовой и обязательной. Затем при смене Федеральных государственных образовательных стандартов стараниями Московского педагогического государственного университета и Научно-методического совета при Министерстве образования России курс МХК был заменен «всеобщей историей

искусств» — крайне дезинтегрированной дисциплиной, формирующей у студентов фрагментарные представления об истории художественно-образного человекознания и об искусстве как самосознании культуры. Общеобразовательные курсы МХК для разных гуманитарных и негуманитарных специальностей пошли на убыль. Неудивительно, что большие проблемы возникают с культурологической компетентностью, поисками идентичности выпускников современной высшей школы.

Между тем в России подготовлена фундаментальная научная литература на уровне философии культуры и культурологии по остроактуальным проблемам современной культуры, по истории региональных культур страны, а также по отдельным видам и жанрам искусства в контексте исторической культурологии [см., например, 2, 6, 7]. Однако она не вводится ни в содержание образования, ни в другие просветительские проекты.

В заключение отметим, что, несмотря на серьезные успехи в развитии культурологии в нашей стране, все еще не разработана концепция образования как социокультурного воспроизводства и развития российской нации, ее исторической и современной идентичности, ее ценностных ориентиров, не создана общая стратегия формирования новой устойчивой архитектоники культурно-образовательного пространства российских регионов и страны в целом.

В этом отношении философы, культурологи и искусствоведы накопили большой долг перед отечественным образованием. Пришло время его отдавать.

Описок литературы:

Искусство в системе культуры / Науч. ред. М.С. Каган. — Л.: Наука, 1987. — 272 с.

Кондаков И.В., Соколов К.Б., Хренов Н.А. Цивилизационная идентичность в переходную эпоху. Культурологический, социологический и искусствоведческий аспект. — М.: Прогресс-Традиция, 2011. — 1024 с. Мосолова Л.М., Валицкая А.П., Щедрина Г.К. Мировая художественная культура. Программа для педагогических институтов. — Л.: Изд-во ЛГПИ им. А.И. Герцена, 1989.

Мосолова Л.М., Валицкая А.П., Щедрина Г.К. Мировая художественная культура. Научно-педагогические и учебно-педагогические материалы. Вып. 1-2. — Л.: Изд-во ЛГПИ им. А.И. Герцена, 1991. — 67 с. Неменский Б.М. Педагогика искусства. — М.: Просвещение, 2007. — 246 с.

Никифорова Л.В. Чертоги власти. Дворец в пространстве культуры. — СПб.: Искусство-СПб, 2011. — 703 с. Поликультурное пространство Российской Федерации в 7 книгах. Науч. рук. и глав. ред. Л.М. Мосолова. — СПб.: ИД «Петрополис», 2012-2015.

Проблемы преподавания мировой художественной культуры в педагогическом вузе. Тезисы сообщений на Всероссийском совещании-семинаре / Отв. ред. Л.М. Мосолова. — Л.: Изд-во ЛГПИ им. А.И. Герцена, 1990. — 91 с.

Стёпин В.С. Цивилизация и культура. — СПб.: СПбГУП, 2011. — 408 с.

[10] Хренов Н.А. Развитие и функционирование зрелищных форм в контексте культуры / Искусство в системе культуры / Науч. ред. М.С. Каган. — Л.: Наука, 1987. — С. 156-158.

[11] Хренов Н.А. Художественная культура эпохи надлома империи в цивилизационном контексте / Искусство эпохи надлома империи: религиозные, национальные и философско-эстетические аспекты. Материалы международной конференции (17-19 мая 2010 г.). — М.: ГИИ, 2010. — С. 15-118.

[12] Художественная культура в докапиталистических формациях / Науч. ред. М.С. Каган. — Л.: Изд-во ЛГУ, 1984. — 303 с.

[1] [2]

[3]

[4]

[5]

[6]

[7]

[8]

[9]

3 ю О

Страница не найдена

В главном меню ты найдешь все разделы и страницы сайта. Например, обо всех мероприятиях можно узнать в разделе «События», а в «Главном штабе» находится вся официальная информация о Движении «ЮНАРМИЯ».

Для того чтобы зарегистрироваться на сайте или войти в личный кабинет, нажми на иконку с человечком, которую ты найдешь в правом верхнем углу экрана. Хочешь, чтобы на сайте сразу появлялась информация, которая относится к твоему региону? Нажми на иконку геолокации и дай нам знать о своем местоположении. Ты можешь воспользоваться поиском, кликнув на иконку лупы. Напечатай в поисковой строке ключевые слова и увидишь все страницы сайта, на которых они упоминаются.

В календаре событий найдется информация о каждом мероприятии, в котором принимают участие юнармейцы. Узнав о предстоящих событиях, ты сможешь точно спланировать свое время!

В разделе «Обучение» ты найдешь все, что позволит тебе провести время с интересом и пользой. Читай статьи, слушай познавательные подкасты и смотри видео, специально созданные нашими лучшими корреспондентами.

Тренируй внимательность и ловкость, соревнуйся с друзьями в онлайн-играх! В них можно играть прямо на нашем сайте, выбрав для себя самую подходящую. Моя любимая — «Юнармейские танки»!

Для тех, кто хочет блеснуть своими знаниями и смекалкой, мы постоянно готовим новые испытания в разделе «Тесты». Отвечай на вопросы и делись своими результатами с друзьями!

В «Библиотеке» мы собрали книги, которые должен прочитать каждый юнармеец! В наших подборках есть издания на любой вкус и возраст, уверен, что ты найдешь что-то интересное и для себя.

«Доска почета» говорит сама за себя — здесь ты познакомишься с юнармейцами, которые заслужили звание «самых-самых». Заслужить место на доске почета может каждый, в том числе и ты!

На странице «Аллея Памяти» мы рассказываем о тех, кто совершил настоящий подвиг, но кого с нами больше нет… ЮНАРМИЯ помнит о своих героях.

Страница конкурса «Минута славы» — это возможность для каждого юнармейца поделиться своими творческими способностями и талантами. Смотри видео с теми, кто уже участвует в конкурсе. Выбирай и оценивай самых лучших!

Будь в курсе всего, что происходит в ЮНАРМИИ! Все самое важное ты увидишь на главной странице сайта, а нажав кнопку «Все новости», — сможешь найти весь информационный архив.

Поздравляю, теперь ты знаешь, как пользоваться сайтом ЮНАРМИЯ! Если захочешь пройти инструктаж еще раз — просто кликни на мою иконку в правом нижнем углу твоего экрана.

Конкурсы и олимпиады по МХК

Мировая художественная культура – это дисциплина, помогающая структурировать знания о музыке, литературе и искусстве, а также проследить закономерности развития культуры в историческом контексте.

5-11 классы, студенты, учителя

5-11 классы, студенты, учителя

5-11 классы, студенты, учителя

8-11 классы, студенты, учителя

8-11 классы, студенты, педагоги

7-11 классы, студенты, педагоги

8-11 классы, студенты, педагоги

школьники, студенты, учителя

1-11 классы, студенты, педагоги

7-11 классы, студенты, педагоги

школьники, студенты, учителя

7-11 классы, студенты, педагоги

школьники, студенты, педагоги

5-11 классы, студенты, педагоги

7-11 классы, студенты, педагоги

5-11 классы, студенты, педагоги

школьники, студенты, педагоги

5-11 классы, студенты, педагоги

Международный онлайн-конкурс по МХК с моментальным подведением итогов.

Международный онлайн-конкурс по МХК с моментальным подведением итогов.

Международный онлайн-конкурс по МХК с моментальным подведением итогов.

Международный онлайн-конкурс по МХК с моментальным подведением итогов.

Международный онлайн-конкурс для всех категорий участников с моментальным подведением итогов.

Международный онлайн-конкурс по МХК с моментальным подведением итогов.

Международный онлайн-конкурс с моментальным подведением итогов.

Международный онлайн-конкурс по МХК с моментальным подведением итогов.

Международный онлайн-конкурс по МХК с моментальным подведением итогов.

Международный онлайн-конкурс для всех категорий участников с моментальным подведением итогов.

8-11 классы, студенты и педагоги

Международный онлайн-конкурс с моментальным подведением итогов.

Международный онлайн-конкурс по МХК и искусствознанию для всех желающих с моментальным подведением итогов.

8-11 классы, студенты и педагоги

Международный онлайн-конкурс по литературе, МХК и истории кино с моментальным подведением итогов.

романских языков и культур | Колледж Маунт-Холиок

Романские языки и культуры | Колледж Маунт-Холиок

Доступ и включение Перейти к содержанию Перейти к навигации

Обновления кампуса

Посетите страницу обновлений кампуса, чтобы получить информацию о реакции горы Холиок на глобальную пандемию. Сайт «Открытие ворот» содержит подробную информацию об осеннем семестре.

Вы здесь

Домашняя страница> Романские языки и культуры

Bienvenue Benvenute Bienvenidas Bem-vindas Bem-vindas Salvete.Выучите одно, выучите их все!

Это философия, которая привлекает студентов к нашей программе «Романские языки и культуры» (RL&C). Крупная или незначительная степень в RL&C может привести к различным национальным и международным карьерам, включая правительство, кулинарию, ученых, неправительственные организации, банковское дело, моду и кино. Благодаря открытию и знанию других языков, литератур, культур и социальных структур, всех центральных элементов традиции гуманитарных наук, учащиеся укрепят свою способность функционировать в межкультурном и глобальном контексте, придя к более глубокому пониманию своего собственного языка. и культура.Программа RL&C открыта для студентов, которые стремятся обеспечить свободное владение как минимум двумя романскими языками, а также знание литературы и культур, которые они представляют.

Познакомьтесь с профессорско-преподавательским составом, увлеченным преподаванием и обучением и стремящимся сотрудничать друг с другом.

Мы предлагаем множество курсов, от начального языка до продвинутой литературы и культуры на французском, итальянском, латинском и испанском языках, а также Консорциум пяти колледжей.

Ознакомьтесь с требованиями к основным и второстепенным романским языкам и культурам.

Просмотрите примеры дипломных работ студентов, ставших кульминацией исследовательских проектов под руководством наставников.

Изучите экспериментальное обучение через учебу за границей, стажировку и возможности карьерного роста.

Прочтите об опыте наших выпускников их собственными словами и свяжитесь с выпускниками через Справочник выпускников Ассоциации выпускников.

Член

Моноклональные антитела против HLA A * 0201 MHC класса I, супернатант культуры, 08-9467-1 Моноклональные антитела против HLA A * 0201 класса I

, супернатант культуры, 08-9467-1 | ARP American Research Products, Inc.

Магазин не будет работать корректно, если куки отключены.

Похоже, в вашем браузере отключен JavaScript. Для наилучшего взаимодействия с нашим сайтом обязательно включите Javascript в своем браузере.

Дополнительная информация
Название продукта Моноклональные антитела против HLA A * 0201 MHC класса I, супернатант культуры
Хост Мышь
Клон OP67
Изотип IgG1 каппа
Иммуноген HLA-A * 02: 01 MHC класс I
Реакционная способность Человек
Форма Культурный супернатант
Склад 2-8C для немедленного использования или при -20C (аликвота)
Использование по назначению Только для исследовательских целей

Все продукты для исследований продаются ТОЛЬКО для использования в лабораторных исследованиях и НЕ ИСПОЛЬЗУЮТСЯ ДЛЯ ЛЕЧЕБНЫХ ИЛИ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРИМЕНЕНИЙ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА ИЛИ ЖИВОТНЫХ.Представленная информация считается точной; однако указанная информация и продукты предлагаются без гарантии или гарантии, поскольку конечные условия использования и вариативность обрабатываемых материалов находятся вне нашего контроля. Ничто из раскрытого здесь не может быть истолковано как рекомендация использовать наши продукты в нарушение каких-либо патентов. ARP American Research Products, Inc. не представляет свои продукты на рассмотрение регулирующим органом каким-либо государственным органом или другой организацией, и мы не проверяем их для клинического, терапевтического или диагностического использования, а также на безопасность и эффективность.Вы несете единоличную ответственность за то, чтобы способ использования продуктов соответствовал применимым законам, постановлениям и государственным политикам, а также за получение всех необходимых разрешений, прав интеллектуальной собственности, лицензий и разрешений, которые могут вам понадобиться в связи с вашим использованием. Ни при каких обстоятельствах ARP American Research Products, Inc. не несет ответственности за ущерб, косвенный, компенсационный, случайный или специальный, строгую ответственность или небрежность, нарушение гарантии или любую другую теорию, возникшую в результате использования продуктов, доступных от ARP American Research. Продукты, Inc.Ничто из содержащегося здесь не гарантирует, что использование продуктов не будет нарушать притязаний каких-либо патентов, касающихся самого продукта или его использования в сочетании с другими продуктами или в работе любого процесса. ARP American Research Products, Inc. отказывается от любых заявлений или гарантий любого рода, явных или подразумеваемых, включая, помимо прочего, любые подразумеваемые гарантии товарной пригодности или пригодности для конкретной цели, ненарушения прав или результатов, полученных в результате использования любого продукта, независимо от того, вытекает ли он из закона или иного закона, или в результате выполнения, деловых операций или использования торговли.

Есть вопросы?

Представитель службы поддержки ARP будет рад помочь!

грантов и возможностей финансирования | Гуманитарный центр Миннесоты%

Гуманитарный центр Миннесоты (MHC) поддерживает образцовую гуманитарную работу отдельных лиц, некоммерческих организаций, школ и коллективов по всему штату посредством своих конкурсных грантов. Кроме того, MHC управляет грантовыми фондами, выделяемыми штатом Миннесота для законодательно названных и конкурсных грантов.Мы — общегосударственная организация, и наши гранты доступны любому жителю штата, который соответствует установленным критериям.

Философия предоставления грантов MHC

Как организация, предоставляющая гранты, MHC работает прозрачно. Мы говорим то, что имеем в виду, мы делаем то, что говорим, мы следим за тем, чтобы не было никаких скрытых или секретных знаний, и мы используем ясный, простой язык. В наших грантах MHC также интегрирует в свою работу справедливость, инклюзивность и разнообразие. Мы отдаем приоритет организациям, лидерство которых отражает сообщества, которым они служат.Мы постоянно обучаемся и ищем новые способы уменьшения препятствий и децентрализации доминирующей культуры в процессе финансирования. Кроме того, MHC всегда работает над построением и углублением отношений, даже посредством предоставления грантов. Хотя в предоставлении грантов есть транзакционные элементы, мы считаем, что оно может быть намного более богатым и полезным, если MHC и получатели грантов будут работать вместе для достижения наших целей и поддерживать друг друга, помимо грантового проекта.

  • Мы тоже претендуем на гранты! Поэтому нам нравится думать, что мы понимаем, что значит быть на другой стороне, и проявляем доброту и сочувствие в своей работе по предоставлению грантов.Это не означает, что мы всегда делаем это правильно — мы хотим, чтобы вы говорили нам, когда мы этого не делаем. Расскажите, пожалуйста, как мы можем улучшить.
  • Мы являемся повторно грантополучателем, что означает, что большую часть времени мы передаем средства, над которыми мы не имеем стопроцентного контроля, включая допустимые или недопустимые расходы, сроки предоставления и многое другое. Но мы обещаем сделать все возможное, чтобы четко понимать, где мы можем быть гибкими, а где есть жесткие линии.
  • Мы — организация штата, и наши гранты доступны любому жителю штата, который соответствует установленным критериям.
  • Мы любим совместно творить. Мы ищем способы участвовать в процессе разработки критериев и работы с нашими грантами. Мы строим и, при необходимости, демонтируем системы, чтобы они работали на вас, а не наоборот.

Университет Западной Каролины — О нас

Присоединяйтесь к нам в Центре горного наследия — отметьте природное и культурное наследие южных Аппалачей.Через выставки, публикации, образовательные программы, и событиях, вы откроете для себя богатые традиции гор, увидите Аппалачи региона с новых точек зрения и уйти с более глубоким пониманием его земля и люди.

Наша миссия

Центр горного наследия — это музей, объединяющий WCU и широкую общественность. в изучении, сохранении и праздновании культурного наследия южных Аппалачей и история.

  • СВЯЗЫВАЕМ людей местной историей и культурой.
  • Мы СТРОИМ МОСТЫ между университетом и региональным сообществом.
  • Мы СЛУЖАЕМ как культурный ресурс для региона.

Музей и программирование

Региональный музей, MHC документирует, изучает и интерпретирует культуру и историю. Южных Аппалачей.Он предоставляет музейные услуги западной части Северной Каролины, собирая артефакты, строительные выставки и демонстрация традиционных навыков, в том числе ремесел и музыка. MHC выпускает книги и музыкальные записи, а также обогащает учебные программы. студентов общеобразовательных школ и вузов.

Основные экспонаты посвящены шотландско-ирландским традициям ремесленничества, гончим Плотта, и горная форель.Смитсоновский институт и Американский центр фольклора имеют перенял некоторые его программы. Начат сбор более 10 000 артефактов. в начале 20 века преподавателями и сотрудниками WCU. Он богат сельскохозяйственными инвентарь, лесозаготовительный и деревообрабатывающий инструмент, текстиль и транспортное оборудование.

MHC стремится к общественной истории, особенно к интерпретации текущих академических исследования Аппалачей.Студенты участвуют во всех аспектах работы MHC, и наши профессиональные сотрудники стремятся помочь им в их карьере. Загрузите этот pdf-файл, чтобы увидеть влияние MHC на регион в 2019 году.

День горного наследия

День горного наследия, осенний фестиваль, который всегда проводится в последнюю субботу сентября, представляет традиционные горная культура десяткам тысяч посетителей.Вы найдете аппалачский танец и песни, в том числе старинные, госпел и мятлик. Изучите традиционные ремесла, демонстрации и участвовать в соревнованиях и не только.

Информация о мероприятии, посвященном Дню горного наследия

Партнерские отношения на территории кампуса WCU

Мы особенно гордимся партнерскими отношениями, которые мы создали с нашей Западной Каролиной. Коллеги по университету.Эти партнерские отношения приводят к тому, что учащиеся и классы создают реальные продукты, такие как цифровые выставки, исследования и образовательные программы, используемые Центром горного наследия

MHC работал с членами исторического факультета, доктором Эндрю Денсоном, Робом Фергюсоном и Джесси Свиггер; сотрудники отдела антропологии, включая доктора Теда Койла, Джейн Истман и Бена Стира; и члены художественного отдела, в том числе д-р.Эрин Тэпли.

Партнерские отношения с офисами по всему университетскому городку включают Центр карьерного и профессионального развития, Центр взаимодействия с общественностью и обучения служению, Библиотеку Хантера, Специальные и электронные коллекции в Библиотеке Хантера, Специальные мероприятия WCU и digitalheritage.org.

Партнерские отношения со студенческими группами включают Исторический клуб и Марширующий оркестр «Гордость гор».

Программы для аборигенов Strong Spirit Strong Spirit Mind

Strong Spirit Strong Mind Aboriginal Programs является зарегистрированной учебной организацией (RTO 50293), которая обеспечивает безопасные в культурном отношении программы обучения для аборигенов и жителей островов Торресова пролива, работающих в секторах наркобизнеса, алкоголя, психического здоровья и социальных услуг. Сюда входит признанный на национальном уровне Сертификат III в области общественных услуг (CHC32015) и Сертификат IV на алкоголь и другие наркотики (CHC43215).

Сертификат III в сфере общественных услуг (CHC32015)

Программа уникальна и отличается от других программ обучения и ориентирована на удовлетворение потребностей аборигенов и жителей островов Торресова пролива, занимающихся алкоголем и другими наркотиками. Контент является культурно безопасным и основан на доказательной практике употребления алкоголя и других наркотиков, особенно в том, что касается работы с коренными народами и сообществами. Учебные материалы и методы были разработаны профессионалами-аборигенами и связаны с мировоззрением аборигенов за счет введения культурных моделей практики и способов работы.

Загрузите форму выражения заинтересованности здесь.

Сертификат IV по алкоголю и другим наркотикам (CHC43215)

Сертификат

«Сертификат IV по алкоголю и другим наркотикам» — это культурно безопасная программа обучения, предназначенная для работников из числа аборигенов, употребляющих алкоголь и другие наркотики. Он будет основываться на знаниях и навыках реагирования на проблемы, связанные с наркотиками и алкоголем, и связанные с ними проблемы в общинах аборигенов. Кроме того, обучение предоставит дополнительные знания и навыки, связанные с психическим здоровьем и сопутствующими проблемами.

Загрузите форму выражения заинтересованности здесь.

Свяжитесь с Программой для аборигенов Strong Spirit Strong Mind по телефону (08) 655 30600 или по электронной почте [email protected] для получения дополнительной информации.

Способ работы с коренными народами

Эта программа, состоящая из двух частей, рассчитана на то, чтобы познакомить участников с работой с коренными народами. Приглашаются к участию всех в секторах AOD и MH, работающие с аборигенами.

Щелкните здесь для получения дополнительной информации

производственных протоколов | NIH Tetramer Core Facility

Приготовление тетрамеров MHC класса I: обзор
Получение тетрамеров MHC можно разбить на серию дискретных этапов:

Векторы экспрессии MHC в E.coli
Экспрессия цепей MHC E. coli в среде «самоиндукции» Studier
Получение телец включения
Сворачивание молекул MHC класса I
Концентрация и биотинилирование BSP-меченных мономеров MHC / пептидов
Колоночная хроматография S300
Подготовка колоночной хроматографии MonoQ
исходный мономер
Анализ биотинилирования
Получение тетрамера: добавление стрептавидина.
Примечания к номенклатуре тетрамеров.

Время рассмотрения

  • Этап 1 включает обычные манипуляции с молекулярной биологией, такие как ПЦР-амплификация фрагмента гена MHC, клонирование и секвенирование.Это легко сделать за неделю. Между этим шагом и другими шагами нет важной временной связи. Здесь описаны только общие характеристики векторов; подробности о клонировании и секвенировании являются обычными и могут быть найдены в общих руководствах по молекулярной биологии.
  • Шаги 2 и 3 связаны и могут быть выполнены за 2 дня. Аутоиндукционные культуры выращивают в течение ночи и собирают утром. Тельца включения обрабатываются в тот же день, замораживание E.шарики кишечной палочки; с другой стороны, замораживание гранул, вероятно, не причинит никакого вреда.
  • Шаг 4 может занять 2-5 дней. Насколько мне известно, MHC и хвост BSP стабильны в сворачивающем буфере, и не так важно быстро переходить к следующим шагам.
  • После того, как вы начнете шаг 5, важно как можно быстрее перейти к завершению шага 8. Хотя глобулярные домены молекулы MHC относительно стабильны и устойчивы к протеазам, которые могут загрязнять препараты, тег BSP является линейным. , неструктурированный объект, который очень чувствителен к протеолизу.Быстрое завершение очистки путем хранения при -80 ° C минимизирует реакции расщепления, которые ингибируют образование тетрамера.
  • Образцы для шага 9 можно хранить при -80 ° C перед анализом, поэтому немедленное выполнение этого шага не является критическим. Однако нет причин не выполнять этот этап в течение недели после завершения очистки тетрамера.
  • Шаг 10 занимает около двух часов. Как только мономеры связываются со стрептавидином, BSP кажется более устойчивым к протеолизу, возможно, потому, что протеазы не могут приблизиться к BSP, не натыкаясь на стрептавидин.

Шаг 1: Приготовление тетрамера MHC класса I: плазмиды экспрессии

Базовая стратегия получения комплексов МНС / пептид класса I из денатурированных субъединиц, продуцируемых в E. coli, была первоначально определена Гарбоци и Уайли в 1992 году. Для получения тетрамера тяжелая цепь сливается с субстратным пептидом BirA (BSP • 41) , полученные из библиотек, сконструированных и проверенных Шацем на последовательности, которые биотинилируются ферментом E. coli BirA. Как тяжелая цепь, так и субъединицы b2m экспрессируются в виде нерастворимых телец включения, которые солюбилизируются обычными денатурантами, такими как мочевина или хлорид гуанидия, перед сворачиванием in vitro.Многие различные промоторы E. coli будут доводить экспрессию до достаточно высокого уровня, чтобы в результате образовывались тельца включения. Для экспрессии субъединицы b2m мы все еще используем исходную плазмиду в векторе pHN1, описанном Garboczi и Wiley; в этой плазмиде используется гибридный промотор trp / lac (так называемый промотор tac), который индуцируется IPTG или лактозой. Напротив, для экспрессии тяжелых цепей класса I мы заменили вектор на основе pHN1 Гарбоци и Уайли любым из множества векторов pET (Novagen), в которых используется мощная система экспрессии T7, впервые разработанная Студье и его коллегами, просто потому, что Векторы pET более доступны и несколько более удобны для субклонирования новых генов MHC.

Подробные протоколы для основных методов молекулярной биологии, необходимых для субклонирования новых аллелей MHC в наши векторы, выходят за рамки этой веб-страницы; эти методы являются обычным явлением почти во всех современных иммунологических лабораториях. Цель этой страницы — предоставить краткое описание наших векторов и простых стратегий, которые мы используем для субклонирования новых аллелей MHC.

Плазмиды экспрессии
Плазмиды, которые мы создали для экспрессии тяжелых цепей MHC класса I, почти все основаны на плазмиде pET24a + от Novagen.Основные характеристики pET24a (+) следующие:

  • Источник репликации основан на pBR322 и приводит к количеству копий, которое находится между плазмидами на основе pACYC и плазмидами на основе pUC или pBluescript.
  • Канамицин используется для отбора трансформированных E. coli. Большинство руководств рекомендуют концентрации канамицина в диапазоне 25-40 мкг / мл. Напротив, мы приняли рекомендации F. W. Studier и используем концентрацию канамицина 100 мкг / мл.
  • Предусмотрено происхождение f1, позволяющее продуцировать одноцепочечную ДНК в бактериофаге.Эта особенность в некотором смысле является пережитком тех времен, когда и мутагенез, и секвенирование требовали производства одноцепочечной ДНК, так называемой фагмидной технологии. Одноцепочечная ДНК больше не требуется для этих целей.
  • Промотор, который управляет экспрессией рекомбинантной тяжелой цепи, представляет собой гибридный промотор T7-lac. В присутствии репрессора lac-Iq гибрид T7-lac обеспечивает более низкие базальные уровни экспрессии по сравнению с исходным промотором T7.
  • Репрессор lac-Iq экспрессируется с конститутивного промотора.Это обеспечивает белок, который связывается с оператором lac в промоторе гибрида T7-lac, и это приводит к лучшему подавлению экспрессии белка в отсутствие IPTG или индуктора лактозы.
  • На 5′-конце кассеты экспрессии мы используем сайты рестрикции NdeI или NheI для клонирования. Если интересующий аллель MHC не имеет сайта Nde I, мы используем его для клонирования; в противном случае мы используем сайт NheI.
  • На 3′-конце кассеты экспрессии мы вставили последовательность для субстратного пептида BirA (BSP), описанного ниже.Мы подготовили две версии наших основных векторов, со слиянием тегов His • и без него после BSP.

pTCF33: вектор для экспрессии белков, слитых с BSP41 Плазмида pTCF33 разработана для клонирования генов с целью получения слитых белков с BSP41. Он основан на pET24a + и имеет следующие дополнительные функции:

  • Для получения C-концевых слияний 3′-конец конструкции содержит кодирующую последовательность для BSP41 в рамке за сайтами рестрикции Kpn I и BamH I.За последовательностью BSP41 следует стоп-кодон. Эти последовательности были клонированы по сайту Hind III. Если интересующий вас ген не содержит сайта BamH I, вам следует клонировать сайт BamH I. В противном случае вам следует клонировать сайт Kpn I.
  • Нерелевантный фрагмент вставки 2kb присутствует перед сайтом Kpn I. Это сделано исключительно для облегчения скрининга последующих рекомбинантных плазмид.
  • На 5′-конце за сайтами Nde I и Nhe I клонируется вставной фрагмент размером 2 КБ.Если интересующий вас ген не содержит сайта Nde I, то он предпочтительнее для клонирования, поскольку он не приводит к появлению дополнительных аминокислот на N-конце белка (кроме инициатора метионина). Однако клонирование в сайты Nde I несколько сложнее, чем клонирование во многие другие сайты рестрикции, и некоторые исследователи могут предпочесть сайт Nhe I. Конечно, если ваш ген содержит сайт Nde I, вам следует клонировать сайт Nhe I.

Мы приготовили два варианта pTCF33 — pTCF33.HisV1 и pTCF33.HisV2 — содержащие теги His6, следующие за BSP. Мы нечасто использовали эти векторы, и тег His обычно не требуется для очистки. Мы исследуем варианты, меченные His, для редких случаев, когда протеолиз BSP представляет собой серьезную проблему, которая не решается стандартными методами. Обратите внимание, что мы обнаружили, что аффинные колонки с ионами металлов несовместимы с буфером фолдинга аргинина, поэтому этот метод нельзя использовать для аффинной очистки непосредственно из реакции фолдинга.

Пожалуйста, свяжитесь с нами для вопросов, карт или другой информации относительно конкретных аллелей MHC класса I.

верх

Шаг 2: Метод Студиера для аутоиндукции экспрессии белка в системе Т7

Этот протокол описывает производство рекомбинантных белков в бактериях с использованием системы экспрессии полимеразы Т7, первоначально разработанной F. W. Studier и его коллегами (часто известной как система pET, продаваемая Novagen, но доступная от других поставщиков, таких как Promega, Stratagene и Invitrogen).В этом протоколе используется метод, разработанный Studier, который обеспечивает «автоиндукцию» экспрессии белка без необходимости добавления индукторов, таких как IPTG, во время фазы середины логарифмической обработки культур. Метод основан на буферной среде, содержащей смесь источников углерода, включая лактозу. Бактерии изначально используют глюкозу; когда глюкоза истощается, лактоза может проникать в клетку и индуцировать экспрессию полимеразы Т7 из лизогена лямбда DE3. Среда обеспечивает высокую плотность культивирования и высокий выход белков, обычно в телец включения.Он широко используется Tetramer Core Facility для продукции субъединиц MHC, используемых во время получения тетрамеров MHC, но также может использоваться для экспрессии других рекомбинантных белков, которые в конечном итоге управляются промотором lac.

Культуры Innoculum выращивают в P-0.5G, определенной минимальной среде для роста до насыщения при высоких плотностях с небольшой индукцией или без индукции экспрессии целевого белка. По данным Studier:

  • Культуры выращенные (в Р-0.5G) при 37 ° C обычно насыщаются в течение ночи при A600 ~ 4-7 и pH ~ 6,5, достаточно стабильны в течение недели или более в холодильнике и выращивают субкультуры с небольшой задержкой. Свежие ночные культуры в P-0.5G создают замороженные запасы, которые остаются жизнеспособными на неопределенный срок, и генерируют культуры, которые производят высокие уровни целевого белка.

Автоиндукционные культуры выращивают в течение ночи (16-20 часов) в среде ZYP-5052. Доступны дополнительные сведения, протоколы и рецепты для минимально определенной среды (подходящей для метаболического мечения рекомбинантных белков селенометионином).Нам это не требуется для наших целей.

Содержание

  • Реактивы
  • Приготовление посевных культур и замороженных запасов глицерина
  • Рост в автоиндукционных средах

Реактивы и исходные растворы

  • Используйте деионизированную дистиллированную воду для всех растворов
  • Автоклавные растворы на 15 мин, если не указано иное

Список реактивов

  • ZY
  • 20x NPS
  • 50x 5052
  • MgSO4
  • 40% глюкозы
  • 80% глицерин
  • 20% α-лактоза
  • Антибиотики
  • П-0.5 . Определенная минимальная среда для роста до насыщения при высокой плотности с небольшой индукцией или без индукции экспрессии целевого белка.
  • ЗИП-0.8Г. ZYP-0.8G представляет собой богатую среду для роста до высоких плотностей с небольшой индукцией экспрессии или без нее, но индукция может не подавляться так строго, как в P-0.5G.
  • ZYP-5052 богатая среда для автоиндукции . ZYP-5052 — это богатая среда для роста с небольшой индукцией или без индукции во время логарифмической фазы и аутоиндукции экспрессии по мере приближения культуры к насыщению.
  • LB Агаровые чашки + 1% глюкозы
  • Буфер для ресуспендирования

ZY

  • 10 г N-Z-амина AS (или любой триптический гидролизат казеина, например, триптон) Sigma cat # N4517
  • 5 г дрожжевого экстракта Мы используем гранулированный экстракт от EM Sciences, доступный от VWR, кат. № EM1.03753.0500
  • 925 мл воды

20x NPS

Компонент 100 мл 1 литр моль / литр
dd H 2 O 90 мл 900 мл–
(NH 4 ) 2 SO 4 6.6 г 66 г 0,5 млн
KH 2 PO 4 13,6 г 136 г 1 Месяц
Na 2 HPO 4 14,2 г 142 г 1 Месяц
  • Последовательно добавить в стакан; размешать, пока все не растворится.
  • pH 20-кратного разбавления водой должен быть ~ 6,75.

50×5052: (5052 = 0.5% глицерина, 0,05% глюкозы, 0,2% α-лактозы)

Компонент 100 мл 1 литр
Глицерин (взвешивать в химическом стакане) 25 г 250 г
H 2 O 73 мл 730 мл
Глюкоза (Fisher FLBP350-1) 2,5 г 25 г
α-лактоза (Sigma cat # L3625) 10 г 100 г
  • Последовательно добавить в стакан, перемешать до полного растворения
  • Лактоза растворяется медленно — перемешивание может занять не менее двух часов.Кратковременное нагревание в микроволновой печи может ускорить растворение лактозы.

1 М MgSO 4

  • 24,65 г MgSO 4 • 7H 2 O
  • Вода для приготовления 100 мл

40% глюкозы (мас. / Об.)

Компонент 100 мл 300 мл
Глюкоза (Fisher FLBP350-1) 40 г 120 г
H 2 O 74 мл 222 мл
  • Добавьте глюкозу в воду для перемешивания в химическом стакане; НЕ ПЫТАЙТЕСЬ ДОБАВЛЯТЬ ВОДУ В ГЛЮКОЗУ!
  • Перемешайте до полного растворения — перемешивание может занять 45 минут или больше.

80% глицерина (об. / Об.) (= 100% мас. / Об.)

  • 100 г глицерина (взвесить в стакане)
  • 20 мл воды

20% α-лактозы по массе )

Компонент 100 мл 600 мл
α-лактоза (Sigma cat # L3625) 20 г 120 г
H 2 O 87.5 мл 525 мл
  • добавить лактозу в воду для перемешивания в химическом стакане
  • перемешать до полного растворения — может потребоваться 2 часа и более

1000-кратная смесь следов металлов (100 мл в ~ 50 мМ HCl) Приготовьте все исходные растворы металлов в ddH 2 O, за исключением FeCl 3 , который растворен в ~ 0,1 М HCl, как указано в таблице ниже. Соедините растворы металлов, как в таблице ниже.

Компонент Объем МВт 1x конц
H 2 O 36 мл––
0.1 M FeCL 3 • 6H 2 O (растворенный в ~ 0,1 M HCl = 100-кратное разбавление конц. HCl) 50 мл 270,30 50 мкМ Fe
1M CaCl 2 2 мл 110,99 20 мкМ Ca
1M MnCl 2 • 4H 2 O 1 мл 197,91 10 мкМ
1 M ZnSO 4 • 7H 2 O 1 мл 287.56 10 мкМ Zn
0,2 M CoCl 2 • 6H 2 O 1 мл 237,95 2 мкМ Co
0,1 M CuCl 2 • 2H 2 O 2 мл 170,486 2 мкМ Cu
0,2 M NiCl 2 • 6H 2 O 1 мл 237,72 2 мкМ Ni
0,1 M Na 2 MoO 4 • 2H 2 O 2 мл 241.98 2 мкМ Mo
0,1 M Na 2 SeO 3 • 5H 2 O 2 мл 263,03 2 мкМ Se
0,1 M H 3 BO 3 2 мл 61,83 2 мкМ H 3 BO 3

Обработайте в автоклаве исходные растворы отдельных металлов, кроме 0,1 M FeCl 3 в 1/100 объема конц. HCl.

Кратковременный осадок появлялся при добавлении Na 2 SeO 3 , который быстро растворялся повторно

Хранить при комнатной температуре

При приготовлении питательной среды добавляйте смесь металлов перед NPS. Если NPS уже присутствует при добавлении смеси металлов в 1000 раз, образуется осадок, который диспергируется, но сохраняет легкую мутность. Если металлы разбавляются почти до их конечной концентрации перед добавлением NPS, среда остается прозрачной. Металлы также осаждаются и диспергируются или повторно растворяются при добавлении к ZY, осадку, вызванному дрожжевым экстрактом.Хотя очевидно, что это не проблема, выпадения осадка можно избежать, разбавив металлы в воде перед растворением дрожжевого экстракта для получения ZY.

Антибиотики

  • Канамицин (25 мг / мл в воде, стерилизовать фильтрованием)
  • Хлорамфеникол (25 мг / мл в 95% этаноле, стерилизовать фильтрованием)
  • Ампициллин (50 мг / мл в воде, стерилизовать фильтрованием)

P-0.5G определенная минимальная среда для роста до насыщения с небольшой индукцией или без нее

  • выращивание двухфазных или насыщенных культур для приготовления морозильных и рабочих запасов
  • Для всех сред добавьте 1 M MgSO 4 и смесь металлов 1000x перед добавлением 20xNPS, чтобы избежать осаждения
Компонент 50 мл 100 мл 200 мл Конечная концентрация
ddH 2 O (стерильный) ~ 46.8 мл ~ 93,6 мл ~ 187,3 мл–
1 М MgSO 4 50 мкл 100 мкл 200 мкл 1 мМ
10000x смесь металлов 5 мкл 10 мкл 20 мкл 1
40% глюкоза 0,625 мл 1,25 мл 2.5 мл 0,5%
20x NPS 2,5 мл 5 мл 10 мл 1х
антибиотики Выберите только 1 из списка ниже
канамицин (25 мг / мл) 0,2 мл 0,4 мл 0,8 мл 100 мкг / мл
хлорамфеникол (25 мг / мл) 50 мкл 100 мкл 200 мкл 25 мкг / мл
ампициллин (50 мг / мл) 50 мкл 100 мкл 200 мкл 50 мкг / мл

ZYP-0.8G

  • Богатая среда для роста с небольшой индукцией или без нее
  • Культура должна стать немного кислой при насыщении (немного ниже pH 6)
  • Сбор культур для замораживания задолго до насыщения
  • Для всех сред: добавьте 1 M MgSO 4 перед добавлением 20xNPS, чтобы избежать осаждения
  • Канамицин используется в значительно более высоких концентрациях (100 мкг / мл), чем обычно (25-40 мкг / мл). Студьер обнаружил, что в штаммах экспрессии Т7 в этих богатых средах он не обеспечивает адекватного отбора при более низких концентрациях.
Компонент 50 мл 100 мл 200 мл 400 мл Концентрация
ZY ~ 46,5 мл ~ 93 мл ~ 186 мл ~ 372 мл–
1 М MgSO 4 50 мкл 100 мкл 0.2 мл 0,4 мл 1 мМ
40% глюкоза 1 мл 2 мл 4 мл 8 мл 0,8%
20x NPS 2,5 мл 5 мл 10 мл 20 мл 1х
Антибиотики по мере необходимости Выберите только 1 из списка ниже
канамицин (25 мг / мл) 200 мкл 0.4 мл 0,8 мл 1,6 мл 100 мкг / мл
хлорамфеникол (25 мг / мл) 50 мкл 100 мкл 0,2 мл 0,4 мл 25 мкг / мл
ампициллин (50 мг / мл) 50 мкл 100 мкл 0,2 мл 0,4 мл 50 мкг / мл

ZYP-5052 богатая среда для автоиндукции

  • Для всех сред добавьте 1 M MgSO 4 перед добавлением 20xNPS, чтобы избежать осаждения
  • Канамицин используется в значительно более высоких концентрациях (100 мкг / мл), чем обычно (25-40 мкг / мл).Студьер обнаружил, что в штаммах экспрессии Т7 в этих богатых средах он не обеспечивает адекватного отбора при более низких концентрациях.
  • Мы используем 400 мл в 2-литровой колбе с перегородкой. Адекватная аэрация важна для работы этой среды. Даже не думайте об использовании более 20% номинального объема колбы. Колбы с перегородками дают значительно лучшую производительность. Вы можете получить адекватные результаты с колбами без перегородки, но я не рекомендую это делать.
Компонент 200 мл 400 мл 500 мл 1 литр Концентрация
ZY ~ 186 мл ~ 372 мл ~ 464 мл ~ 928 мл–
1 М MgSO 4 0.2 мл 0,4 мл 0,5 мл 1 мл 1 мМ
50x 5052 4 мл 8 мл 10 мл 20 мл 1х
20x NPS 10 мл 20 мл 25 мл 50 мл 1х
Антибиотики Выберите только 1 из списка ниже
канамицин (25 мг / мл) 0.8 мл 1,6 мл 2 мл 4 мл 100 мкг / мл
хлорамфеникол (25 мг / мл) 0,2 мл 0,4 мл 0,5 мл 1 мл 25 мкг / мл
ампициллин (50 мг / мл) 0,2 мл 0,2 мл 0,5 мл 1 мл 50 мкг / мл

LB Чашки с агаром + 1% глюкозы

  • Стерилизовать агар LB как обычно для разливки чашек.Дайте агару остыть до 55-60 ° C, обычно на водяной бане 56 ° C.
    • Добавьте 1/40 объема 40% глюкозы (например, для 400 мл добавьте 1 мл глюкозы).
    • Добавьте антибиотик до подходящей концентрации.
    • Залить тарелку

Буфер ресуспендирования

  • 50 мМ Трис-HCL
  • 25% (мас. / Об.) Сахароза
  • 1 мМ ЭДТА
  • 0,1% (мас. / Об.) NaAzide
  • 10 мМ DTT (добавить свежий)

Процедура

  1. В конце дня 1 штриховку трансформированных плазмидой бактерий BL21 (DE3) из замороженного глицеринового исходного материала на чашку агара LB + 1% глюкозы с подходящим антибиотиком.Поместите в инкубатор при 37 ° C на ночь. Можно использовать альтернативные штаммы, несущие полимеразу Т7 под контролем промотора lacUV5 в лизогене лямбда DE3. Примеры включают штаммы BL21 (DE3) RIL и BL21 (DE3) RP от Stratagene, которые несут плазмиды на основе pACYC, экспрессирующие тРНК, которые редко встречаются в E. coli. Эта процедура также может работать для систем экспрессии, использующих промоторы lac или tac, такие как плазмиды pHN1 (Garboczi et al.), которые мы используем для экспрессии HLA-A2-BSP и человеческого b2m.
  2. Утром на 2-й день перенесите одну колонию из чашки со свежим агаром в 2 мл ZYP-0.8G плюс соответствующий антибиотик в пробирке 18 x 150 мм с защелкивающимся колпачком. Встряхивайте со скоростью 300 об / мин при 37 ° C в течение 6-8 часов, пока культура не станет мутной, но не насыщенной. В качестве альтернативы вы можете использовать LB + 1% глюкозы, но ваши шансы на неудачу увеличиваются, потому что культуры бактерий в среде LB больше вероятно потеря экспрессионной плазмиды, когда культуры приблизятся к насыщению.
  3. Пока растет посевная культура на этапе 2, подготовьте 6 2-литровых колб Эрленмайера с перегородками, каждая из которых содержит 400 мл среды ZYP-5052 плюс соответствующий антибиотик.Адекватная аэрация культур важна для достижения оптимальной экспрессии белка с помощью этого метода. Важно использовать колбы с перегородками и поддерживать объем жидкости в 2-литровой колбе на уровне или ниже 400 мл. 5052 в ZYP-5052 обозначает 0,5% глицерина, 0,05% глюкозы и 0,2% α-лактозы.
  4. К концу 2-го дня перенесите 200 мкл посевной культуры в каждую из 6 2-литровых колб, содержащих 400 мл антибиотика ZYP-5052 +. Встряхивать со скоростью 300 об / мин при 37 ° C в течение ночи.
  5. Утром на 3-й день охладите культуры, поместив колбы Эрленмайера с ведрами со льдом для культур.Используйте плоские мелкие ведра для льда.
  6. Пока культуры остывают, возьмите по 1,0 мл пробы из каждой колбы и поместите в помеченную 1,5 мл микроцентрифужную пробирку. Приготовьте разбавление 1:10 каждого образца, перенеся по 0,1 мл каждого образца в каждую из второго набора микроцентрифужных пробирок, содержащих 0,9 мл свежего ZYP-5052. Подготовьте дополнительную микроцентрифужную пробирку, содержащую 1,0 мл свежего ZYP-5052, для использования в качестве холостого опыта.
  7. Измерьте OD (600) разведений 1:10 каждой из культур и запишите результат в базу данных контроля качества Inclusion Body.Эта база данных используется в лаборатории Альтмана для записи данных из Inclusion Body Preps. Другие могут просто записать эти данные в свои записные книжки
  8. Гранулировать бактерии в оставшиеся 0,9 мл, вращая микроцентрифугу на 1/2 полной скорости в течение 2 минут. Аспирируйте супернатант.
  9. Ресуспендируйте бактерии в микроцентрифужных пробирках в восстанавливающем буфере для образцов 1X SDS-PAGE (SDS-rSB) в два этапа: (1) добавьте 50 мкл SDS-rSB (или воды?) К каждому из осадка и энергично перемешайте, чтобы ресуспендировать гранула; (2) добавить 400 мкл SDS-rSB к каждой из этих суспензий, чтобы довести общий объем SDS-rSB до 1/2 объема культуры.Эти образцы будут использоваться для последующего анализа общего бактериального белка с помощью SDS-PAGE. Двухэтапный протокол используется для облегчения полного ресуспендирования бактерий. Если это делается за один этап путем добавления 450 мкл буфера для образцов, осадки трудно ресуспендировать. Вам не нужно брать пробы из всех 6 колб, но вы должны анализировать их как минимум из одной или двух. Наконец, рекомендуется подготовить дополнительную пробирку с разведением 1:10 образцов SDS (в SDS-rSB) для работы с гелем в случае, если образцы с полной концентрацией сильно перегружают гель.
  10. Убедитесь, что хромосомная ДНК в образцах тщательно срезана встряхиванием. Контрольными признаками неразрезанной ДНК являются «вязкая» консистенция, которая наблюдается, когда пробирки открываются или когда в наконечник пипетки набирается небольшой объем. Если остаточная неотрезанная ДНК остается, ее можно разрезать путем дальнейшего интенсивного встряхивания. В крайнем случае, ДНК можно разрезать ультразвуком в течение 2-3 минут с использованием ультразвукового устройства с микронаконечником при рабочем цикле 50%, при этом образцы охлаждаются льдом.Полное разделение ДНК необходимо для получения высококачественного геля SDS-PAGE.
  11. Объедините содержимое двух колб Эрленмайера в одну центрифужную бутыль емкостью 1 литр, в результате чего в колбах получится 800 мл бактериальной культуры. Аналогичным образом объедините содержимое оставшихся колб в 2 дополнительных центрифужных флакона, получив в итоге три центрифужные флаконы, каждый из которых содержит 800 мл культуры. Выровняйте объем бактерий в культурах на глаз, перенеся культуральную жидкость из одного или нескольких флаконов в один флакон, который может содержать немного меньше жидкости.Уравновешивайте бутылки на весах, перемещая жидкость пипеткой из более тяжелых бутылок в более легкие.
  12. Гранулируйте бактерии в бутыли емкостью 1 литр, вращая в течение 20 минут при 5000 x g при 4 ° C.
  13. Пока бактериальные культуры находятся в центрифуге, приготовьте гель SDS-PAGE для анализа общего белка. Вы должны быть в состоянии подготовить по крайней мере разделяющую часть геля до завершения центрифуги.
  14. Слейте супернатанты из литровых центрифужных бутылок в большое ведро или химический стакан, обработайте несколькими сотнями мл 100% -ного отбеливателя, а затем слейте в канализацию, промывая большим количеством воды.
  15. Добавьте 20 мл буфера для ресуспендирования к каждому бактериальному осадку в 1-литровых бутылях. Ресуспендируйте до однородности, энергично встряхивая на качалке платформы в холодной комнате. Это может занять до 20-30 минут. В качестве альтернативы вы можете ресуспендировать бактерии энергичным пипетированием, но это требует гораздо большего ручного вмешательства и является пустой тратой вашего драгоценного времени.
  16. Пока бактерии трясутся в буфере для ресуспендирования, завершите приготовление геля SDS-PAGE. Кроме того, установите полный стакан на 500–1000 мл воды для кипячения для нагрева образцов SDS-PAGE.
  17. Запустите гель SDS-PAGE во время обработки бактерий для выделения телец включения. Сохраните образцы в буфере для образцов SDS на несколько дней, даже если вы использовали гель. Возможно, вы захотите запустить другой гель, содержащий как бактериальный лизат, так и промытые тельца включения.
  18. Изолируйте и промойте тельца включения, следуя протоколу «Подготовка тельца включения». Сделайте это в тот же день, когда собираете бактерии, чтобы не было необходимости их замораживать.Если это абсолютно необходимо, вы можете мгновенно заморозить бактерии в пластиковых центрифужных пробирках на 50 мл с завинчивающейся крышкой для последующей обработки, но, возможно, с этим можно было бы покончить со всем этим.

верх

Этап 3: Подготовка тела включения

Этот протокол описывает изоляцию и отмывку телец включения. Эти протоколы адаптированы из протоколов, первоначально описанных Дэвидом Гарбочи.

Материалы и реагенты

Оборудование (обратите внимание, что большая часть этого может быть заменена аналогичным оборудованием, доступным вам)
  • Одноразовые кюветы
  • Полипропиленовые центрифужные флаконы Beckman на 1 л с завинчивающейся крышкой и гильзами для бутылок
  • Полипропиленовые центрифужные пробирки с завинчивающейся крышкой 50 мл
  • Полипропиленовые центрифужные пробирки с завинчивающейся крышкой, 15 мл
  • Стакан из полипропилена 100 мл
  • Одноразовый стакан из полипропилена 500 мл
  • Полиалломерные трубки Beckman 25 x 89 мм
  • Пластиковый (тефлоновый) стержень для перемешивания
  • Перемешивающая пластина Fisher Scientific
  • Центрифуга Beckman CS-15R с ротором FO 630
  • Центрифуга Beckman JA-6 с JS 4.2 ротора
  • Звуковой дисмембратор Fisher Scientific 550 с ультразвуковым преобразователем CL4 и шкафом
  • Fisher Scientific Lab Джек
Реагенты и химикаты
  • 50 мг / мл лизоцим
  • 1,0 М MgCl2
  • 2 мг / мл ДНКазы I в 50% глицерине, 75 мМ NaCl
  • Тритон-Х 100
  • 1M DTT
Буфер для ресуспендирования (pH 8,0):
  • 50 мМ Трис-HCL
  • 25% (мас. / Об.) Сахароза
  • 1 мМ ЭДТА
  • 0.1% (мас. / Об.) NaAzide
  • 10 мМ DTT (добавить свежий)
Промывочный буфер (pH 8,0):
  • 50 мМ Трис-HCl
  • 0,5% Тритон-Х100
  • 100 мМ NaCl
  • 1 мМ ЭДТА
  • Азид 0,1%
  • 1 мМ DTT (добавить свежий)
Промывочный буфер без Тритона X-100 (pH 8,0):
  • 50 мМ Трис-HCl
  • 100 мМ NaCl
  • 1 мМ ЭДТА
  • 0,1% азид
  • 1 мМ DTT (добавить свежий)
Раствор мочевины (pH 6.0):
  • 25 мМ MES (pH 6,0)
  • 8 M мочевина
  • 10 мМ ЭДТА
  • 0,1 мМ DTT (добавить свежий)

Процедура
Этот протокол начинается с суспензии E. coli, приготовленной в соответствии с протоколом автоиндукции.

  1. Объедините ресуспендированные бактерии, поместив их в полипропиленовый стакан объемом 100 мл, содержащий стержень для перемешивания 1/2 дюйма. Если вы проигнорировали мои просьбы не замораживать бактериальные гранулы, разморозьте замороженные гранулы перед переносом в стакан.
  2. Перемешайте бактериальную суспензию на мешалке с умеренной скоростью.
  3. К перемешиваемой смеси (обычно 60 мл) по каплям добавляют: 1,2 мл 50 мг / мл лизоцима (конечный результат = 1 мг / мл), 300 мкл 1,0 M MgCl2 (конечный результат = 5 мМ), 1,0 мл 2 мг / мл ДНКазы I в 50% глицерин, содержащий 75 мМ NaCl, 600 мкл Triton-X 100 (конечный результат = 1%), 600 мкл 1M DTT (конечный результат = 10 мМ). Отрегулируйте объемы соответствующим образом, если объем ресуспендированных бактерий не составляет 60 мл. Этот процесс, обычно после добавления Triton X-100, резко увеличивает вязкость раствора, так как хромосомная ДНК бактерий высвобождается.Поскольку у ДНКазы есть шанс переваривать ДНК, вязкость будет уменьшаться. Последующая обработка суспензии ультразвуком служит двойной цели: (1) гарантировать, что бактерии полностью лизируются; и (2) для дальнейшего разделения ДНК, которая не полностью переваривается ДНКазой. Обработка ультразвуком также используется для промывки телец включения, чтобы гарантировать однородность повторного суспендирования.
  4. Удалите стержень мешалки из бактериальной суспензии.
  5. Поместите стакан на 100 мл с лизатом бактерий в одноразовый стакан из полипропилена на 500 мл, содержащий лед, так, чтобы стакан меньшего размера прочно удерживался на месте.
  6. Поместите вышеуказанное на лабораторный домкрат внутри корпуса ультразвукового аппарата и вставьте ультразвуковой преобразователь CL4 в стакан емкостью 100 мл, содержащий бактериальный лизат. Отрегулируйте лабораторный домкрат так, чтобы ультразвуковой преобразователь находился на максимальной глубине, не касаясь дна стакана.
  7. Обработайте раствор ультразвуком в течение 1,5 мин с чередованием мощности по 0,5 сек. 4.
  8. Проверьте вязкость раствора, набрав аликвоту в наконечник пипетки на 1 мл. Если раствор течет свободно, не образуя «струн», переходите к шагу 9.В противном случае повторите шаг 7, следя за тем, чтобы раствор не нагрелся.
  9. Перенесите лизаты в три полиалломерные пробирки Beckman 25 х 89 мм и центрифугируйте в центрифуге Beckman CS-15R с ротором FO 630 при максимальных оборотах в минуту в течение 10 минут при 4 ° C.
  10. Возьмите 50 мкл образца супернатанта, пометьте S1 и храните при -20 ° C.
  11. Слить супернатант и добавить к осадку 1-2 мл промывочного буфера.
  12. Полностью диссоциировать осадок с помощью тефлоновой палочки для перемешивания, добавить промывочный буфер до 15 мл и продолжать перемешивать, пока осадок не диспергируется.
  13. На льду обработайте раствор ультразвуком в течение 1,5 мин при чередовании мощности по 0,5 сек. 4.
  14. Центрифугируйте образцы в центрифуге Beckman CS-15R с ротором FO 630 при максимальных оборотах в минуту в течение 10 минут при 4 ° C.
  15. Слейте супернатант и возьмите образец объемом 50 мкл (S2).
  16. Повторите эту стадию промывки 3X и возьмите образцы супернатанта (S3-S5). Количество этапов промывки зависит от удаления загрязняющего материала. Обычно это очевидно, поскольку гранулы после каждого этапа центрифугирования содержат концентрические кольца материала.Внутреннее кольцо компактное и более светлого цвета; он содержит желаемый белок. Наружные кольца менее компактны и содержат загрязнения. Размер внешнего кольца уменьшается с каждым этапом стирки; вы должны мыть несколько раз, пока внешнее кольцо почти не исчезнет.
  17. Ресуспендируйте гранулы в промывочном буфере без Triton X-100, как указано выше.
  18. Центрифуга в центрифуге Beckman CS-15R с ротором FO 630 при максимальных оборотах в минуту в течение 10 минут при 4 ° C.
  19. Слить супернатант и ресуспендировать осадок в 200 мкл ддх30.После образования белой пасты ресуспендируйте гранулы в общем 10 мл раствора мочевины. (т.е-3 гранулы в 10 мл M мочевины).
  20. Центрифугируйте 10 мл телец включения в центрифуге Beckman CS-15R с ротором FO 630 при максимальных оборотах в минуту в течение 10 минут при 4 ° C.
  21. Перенесите супернатант в полипропиленовую центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой на 15 мл.
  22. Разведите 2 мкл указанных выше телец включения в 98 мкл раствора мочевины и выполните УФ-сканирование от 240 до 320 нм.
  23. Рассчитайте концентрацию белка.Аликвотирование фракций по 500 нМоль в пробирки Эппендорфа.
  24. Быстро заморозить аликвоты в жидком азоте и хранить при -80 ° C.
  25. Выполните предварительную индукцию, постиндукцию, S1-S5 и окончательный образец телец включения на 10% или 12% геле SDS PAGE. Обычно мы используем 12% гели. При запуске b2m на геле важно остановить гель, как только передняя часть красителя бромфенолового синего покинет нижнюю часть геля, если не раньше.

верх

Шаг 4: Протоколы тетрамера: реакция сворачивания

Эта страница содержит инструкции по настройке in vitro фолдинга комплексов MHC / пептид класса I.Протокол, использованный при первоначальном получении тетрамеров MHC от Altman et al., Был получен от Garboczi и Wiley.

Реагенты и растворы

Реагенты для 500 мл реакции:
  • 0,768 25 г восстановленного глутатиона
  • 0,153 15 г окисленного глутатиона
  • 0,5 мл 200 мМ PMSF
  • 15 мг пептида
  • 500 мкл ДМСО
  • 1,5 ммоль телец включения (тяжелая цепь)
  • 1 ммоль человеческих тел включения b2m (легкая цепь)
Буфер для складывания (pH 8.3):
  • 42,14 г L-аргинина (конечная концентрация: 400 мМ)
  • 50 мл 1M Трис (конечная концентрация: 100 мМ)
  • 2 мл 1,5 М ЭДТА (конечная концентрация: 2 мМ)
  • ddh3O до 500 мл
  • довести pH до 8,3
Буфер для инъекций (pH 4,2):
  • 3M Гуанидин HCl
  • 10 мМ NaC2h4O2 (ацетат натрия)
  • 10 мМ ЭДТА

День 1

  1. Буфер складной холодильный. В стеклянной колбе Эрленмейера на 1 л, снабженной большой мешалкой, охладите 500 мл буфера для складывания до 10 ° C.
  2. Добавьте первые три реагента в буфер для сворачивания. Добавьте восстановленный глутатион, окисленный глутатион и ФМСФ в буфер холодного сворачивания.
  3. Растворите пептид в ДМСО. Взвесьте 15 мг пептида и добавьте его к 500 мкл ДМСО в пробирке Эппендорфа. Примечание. Если пептид нерастворим в ДМСО, последовательно добавляйте небольшие количества TCA (100% раствор) (~ 0,05 мл) до его растворения. В качестве альтернативы можно использовать TFA.
  4. Добавить пептид к реакционной смеси при перемешивании.
  5. Загрузите тела включения в два шприца.Загрузите 500 нмоль тяжелой цепи и 1000 нмоль hub2m в два отдельных одноразовых шприца объемом 3 куб. См, используя иглу калибра 20.
  6. Поместите реакции сворачивания на тарелку для перемешивания и введите тела включения. Поместите реакцию складывания на перемешивающую пластину, настроенную на высокую скорость. Замените иглу 20 г иглой 26 г. С силой введите тяжелую цепь и легкую цепь в реакционную смесь как можно ближе к стержню для перемешивания.
  7. Инкубируйте реакцию сворачивания в течение ночи при 10 ° C. Встряхните реакцию сворачивания в охлаждаемом инкубаторе / шейкере при 70 об / мин и 10 ° C и инкубируйте в течение 1-3 дней.Если у вас нет доступа к оборудованию, которое может поддерживать температуру на уровне 10 ° C, вы можете инкубировать реакции складывания при 4 ° C, например, на магнитной мешалке в холодной комнате.

День 2

  1. Утром загрузите и введите тяжелую цепь в реакцию сворачивания. Загрузите 500 нмоль тяжелой цепи в шприц объемом 3 куб. См, используя иглу калибра 20. С силой введите тяжелую цепь в реакционную смесь как можно ближе к стержню для перемешивания.
  2. Храните реакцию сворачивания при 70 об / мин и 10 ° C в течение всего дня.
  3. Вечером загрузите и введите тяжелую цепь в реакцию сворачивания. Вечером загрузите 500 нмоль тяжелой цепи в шприц объемом 3 см3, используя иглу 20 г. Введите тяжелую цепь в реакцию, как описано выше.
  4. Инкубируйте реакцию сворачивания в течение ночи при 10 ° C. Встряхните реактор сворачивания при 70 об / мин и температуре 10 ° C. Хранить на ночь. Можно инкубировать реакции сворачивания еще несколько дней; вредные побочные реакции, такие как протеолиз BSP-метки, по-видимому, очень медленны в буфере сворачивания.

верх

Стадия 5: Получение тетрамера MHC класса I: Концентрация реакции сворачивания и биотинилирование

В конце инкубации реакции сворачивания МНС / пептида класса I свернутый белок концентрируется ультрафильтрацией, буфер заменяется на одноразовых колонках PD-10, содержащих смолу G25, и метка BSP биотинилируется ферментом BirA. Раньше мы проводили реакцию биотинилирования после очистки свернутого белка на колонке с Sephacryl S300 (или на колонке Superdex S200), но мы обнаружили, что описанный здесь протокол позволяет нам пропустить пару последующих шагов, экономя время и возможно улучшение конечной урожайности.

Материалы и оборудование

Реактивы
  • 1 мг / мл леупетин в исходном состоянии
  • 1000x Пепстатин
  • 100 мМ PMSF
  • 100 мМ АТФ (конечная концентрация 5 мМ)
  • 100 мМ биотина
  • Фермент BirA (Avidity, или выращенный в домашних условиях)
Буфер для биотинилирования
  • 100 мМ Трис (pH 7,5)
  • 200 мМ NaCl
  • 5 мМ MgCl2
  • Отрегулируйте pH до 7,5

    Обратите внимание, что Avidity рекомендует реакционный буфер BirA на основе бицина с pH 8.3. Буфер Avidity был получен в результате экспериментов по кинетической оптимизации либо с низкомолекулярными субстратами, либо с белками, меченными BSP. Мы не перешли на буфер с pH 8,3 по нескольким причинам: (1) наш буфер работает; и (2) нас беспокоит стабильность пептидных комплексов MHC при pH 8,3, включая восприимчивость к конкурирующим протеолитическим реакциям. Мы не исследовали ничего из этого систематически.

Оборудование и принадлежности
  • Охлаждаемая настольная центрифуга.
  • Высокоскоростная центрифуга с ротором, вмещающим бутылки объемом 250 мл.
  • Баллон с азотом и соответствующий регулятор
  • Ячейка с перемешиванием Millipore Amicon 8400 (Кат. № 5124)
  • Biomax PB Полиэфирсульфоновые ультрафильтрационные мембраны 10,000 NMWL (Кат. № PBGC07610), Millipore
  • Центробежный фильтр Amicon Ultra-15 PLGC 10,000 NMWL (Кат. № UFC

    4, упаковка из 24 шт.)

  • Опреснительная колонна PD-10 от GE (кат. № 17-0851-01)
  • Резервуар для буфера LabMate PD-10 (номер по каталогу 18-3216-03)

Протокол концентрации

  1. Реакция складывания на центрифуге для удаления осажденного белка. Перед концентрацией разделите реакцию сворачивания на три равные части и распределите по трем центрифужным пробиркам. Центрифуга реакции сворачивания при 13000 об / мин в течение 15 минут. Используйте пробирки Beckman 250 мл с соответствующими крышками Beckman. На этом этапе удаляется осажденный белок, который может закупорить мембрану ультрафильтрации на следующем этапе.
  2. Соберите концентратор Amicon 8400. Поместите мембрану Biomax (NMWL: 10k) в чистую ячейку для перемешивания Amicon на 400 мл (модель 8400) блестящей стороной мембраны вверх.Поместите уплотнительное кольцо между основанием ячейки и мембраной, чтобы закрепить мембрану на месте. Навинтите корпус ячейки на основание так, чтобы шкала объема находилась на той же стороне, что и выступ трубки элюата.
  3. Добавьте супернатант реакции сворачивания в концентратор. Добавьте центрифугированный супернатант реакции сворачивания в ячейку концентратора и поместите крышку ячейки на корпус концентратора. Убедитесь, что прокладка в крышке присутствует и не повреждена.
  4. Присоедините концентратор к бензобаку N 2 . Подсоедините провод от газового баллона N2 к крышке концентратора. Установите переключатель сброса давления в вертикальное положение. (Этот переключатель можно повернуть горизонтально, чтобы сбросить давление в концентраторе.) Медленно включите газ, чтобы давление увеличилось до максимального значения от 60 до 65 фунтов на квадратный дюйм.
  5. Сконцентрируйте реакцию сворачивания до 7,5 мл и остановите N 2 . Примечание: чтобы сконцентрировать реакцию складывания точно на 7.5 мл, измерьте объем концентрата после того, как он упадет значительно ниже отметки 50 мл на концентрационной колбе (около 20 мл). Используйте небольшой градуированный сосуд (например, полипропиленовую трубку Falcon на 15 мл) вместо сборной бутылки и следите за процессом элюирования.

Протокол обмена буфера
На этом этапе происходит быстрая замена буфера сворачивания, который заменяется реакционным буфером BirA.

  1. Концентрированная реакция сворачивания на центрифуге. Поместите концентрат реакции сворачивания в центрифужную пробирку на 25 мл.Центрифугируйте концентрат в течение 10 минут при 15300 об / мин при 4 ° C. Это удалит любой осадок, который мог накопиться во время концентрирования реакции фолдинга. Часто мы выполняем этот шаг путем аликвотирования всего образца в несколько микроцентрифужных пробирок с последующим объединением супернатанта.
  2. Подготовьте три колонки PD-10 Sephadex G-25 M. Уравновесьте каждую из трех колонок PD-10 (Amersham Pharmacia # 17-0851-01), добавив 5 мл буфера для биотинилирования в каждую пробирку пять раз (общий объем 25 мл на колонку).Обратите внимание, что Amersham / Pharmacia теперь продает удобные резервуары емкостью 25 мл для уравновешивания их колонок PD-10.
  3. Добавьте 2,5 мл белка в каждую колонку. Дайте возможность протоку попасть в отходы.
  4. Поместите полипропиленовую пробирку на 15 мл под одной из трех колонок. Эта трубка будет улавливать поток каждой из трубок.
  5. Последовательно добавьте 3,5 мл буфера для биотинилирования в каждую колонку. Буфер для биотинилирования элюирует белок из колонки.Перед каждым последующим добавлением буфера для биотинилирования поместите полипропиленовую трубку под колонку. В качестве альтернативы элюируйте белок в три пробирки и объедините содержимое. Конечный общий объем белка должен составлять 10,5 мл.

Биотинилирование

  1. Добавьте к элюату (10,5 мл) следующее:
    • 500 мкл АТФ (100 мМ в исходном состоянии)
    • 40 мкл биотина (100 мМ исходное)
    • 10 мкл лейпептина (1000x запас)
    • 10 мкл Пепстатина (100x запас)
    • 20 мкл PMSF (0.1M в наличии)
    • 20 мкл фермента BirA (исходная концентрация ~ 1 мг / мл).
      Мы понимаем, что в этом протоколе нам неизвестно соотношение фермент / субстрат. Однако мы по-прежнему считаем, что биотинилирование на этом этапе удобно и в конечном итоге экономит время.
  2. Перемешайте осторожным переворачиванием и инкубируйте при комнатной температуре в течение 12 часов (в течение ночи). Если температура в вашей лаборатории переменная (как наша!), Вы можете рассмотреть возможность помещения образца в водяную баню с температурой 20 ° C в холодной комнате.Во время реакции BirA может образоваться небольшой осадок. Это не повод для беспокойства. Осадок удаляют центрифугированием в начале следующего подпротокола.

верх

Этап 6: Получение тетрамера: очистка биотинилированного белка MHC с помощью колоночной хроматографии на S300

Шаги, описанные на этой странице и на страницах хранения MonoQ и биотинилированного мономера, следует выполнять как можно быстрее, чтобы свести к минимуму возможность протеолиза очищенного биотинилированного белка MHC.После ферментативного биотинилирования запускают колонку для препаративной гель-фильтрации, которая служит двум целям:

  1. Удаление избытка свободного биотина, который может препятствовать последующему образованию тетрамера; Также удаляется АТФ, который может мешать точному определению концентрации белка с помощью спектрофотометрии
  2. Удаление агрегированного белка, который не выпал в осадок на предыдущих этапах.

Первоначально мы использовали колонку Superdex 200 26/60 для этого шага. Несколько лет назад мы заменили эту колонку колонкой Sephacryl S300 26/60, которая дала нам эквивалентное разделение для нашего конкретного образца, но стоила от 1/5 до 1/10 стоимости колонки Superdex.

Приведенные ниже инструкции относятся к старой системе Pharmacia FPLC. Конечно, если у вас в лаборатории другая система хроматографии, вам следует соответствующим образом скорректировать протокол.

Наконец, один комментарий о важности свежих буферов. По нашему опыту, наиболее распространенной проблемой с препаратами тетрамеров является протеолитическое расщепление BSP (субстратный пептид BirA) за счет загрязнения протеазами. Каждый раз, когда мы видим это в лаборатории, в первую очередь мы заменяем буфер для биотиниляции и буферы для колоночной хроматографии.Практически всегда это решает проблему. Теперь мы регулярно меняем буферы для колоночной хроматографии, по крайней мере, каждые две недели, если не чаще.

Реактивы

  • Буфер A: 20 мМ Трис, pH 8,0
  • Буфер B: 20 ​​мМ Трис, 500 мМ NaCl, pH 8,0
  • Колонка с сефакрилом S300 26/60 (каталожный номер 17-1196-01)

I. Подготовка системы FPLC

  1. Проверьте уровни буфера A (20 мМ Трис, pH 8) и буфера B (20 мМ Трис, pH 8, + 500 мМ NaCl) в их резервуарах (обычно 1 или 2-литровых бутылях).Перед тем, как продолжить, вы должны выпить не менее 500 мл каждого из них. См. Примечания выше о свежести буферов.
  2. Присоедините супер петлю объемом 10 мл (коричневая катушка) к клапану 1 (позиции 2 и 6). Система Pharmacia поставляется с поршневым поршнем «Superloop» объемом 10 мл. Мы заменили его петлей из ПЭЭК на 10 мл, которую мы получили от Upchurch. Нам пришлось заменить фитинги на фитинги M6, совместимые с Pharmacia, которые мы также получили от Upchurch. Хотя для загрузки этой петли требуется немного большее давление вручную, чем для загрузки петли Pharmacia Superloop, ее намного легче промыть на месте, поэтому нам не нужно снимать ее для очистки.Перед введением протеина в эти петли необходимо принять две меры предосторожности. Во-первых, вы должны убедиться, что он не содержит белка и соли из предыдущего цикла, которые могут загрязнить ваши образцы. Во-вторых, перед введением пробы вы должны убедиться, что в петле отсутствуют пузырьки воздуха. См. Шаги ниже, в которых это подробно описано. Наконец, не забудьте промыть иглу для пробы перед загрузкой шприца. Всегда руководствуйтесь здравым смыслом, чтобы избежать перекрестного заражения.
  3. Перед введением образца в колонку центрифугируйте его в течение 10 минут при 15300 об / мин и 4 ° C. Обычно для этого мы разделяем образец на 5-6 отдельных пробирок Эппендорфа, что имеет то преимущество, что они одноразовые и всегда удобные. Это также можно сделать в одной большой трубке, рассчитанной на такую ​​перегрузку; большинство пробирок Falcon (15 и 50 мл) — нет. Осторожно перенесите супернатанты из каждой пробирки в единственную полипропиленовую пробирку на 50 мл.
  4. Примечание. При работе на столе держите образец и все буферы / реагенты на льду (~ 4 ° C).

II. Промывка петли

  1. Включите клавиатуру. Нажмите кнопку [MANUAL] на FPLC LCC-500, чтобы включить клавиатуру.
  2. Установите положение клапана переключения впрыска и колонки. Нажмите кнопку [ШАГ ВПЕРЕД] три раза, чтобы перейти в режим клапана. Закройте клапан 1, установив его в положение 2, введя [1.2], а затем [СОХРАНИТЬ]. Настройте клапаны селектора столбцов на обход всех столбцов (позиция 1 на наших клапанах 4 и 5).
  3. Удалите иглу из порта инъекции. Иглу следует вынимать из порта инъекции только при закрытом клапане 1. Запорный клапан 1 предотвращает попадание воздуха в линию и его последующую закачку в колонну.
  4. Заполните шприц промывочным буфером и вставьте иглу в порт для инъекции FPLC. Тщательно промойте шприц объемом 10 мл 20 мМ Трис (pH 8). Наполните шприц 10 мл 20 мМ Трис (pH 8), удалите все лишние пузырьки воздуха и вставьте иглу в порт для инъекции. Промывочный буфер пока не вводить!
  5. Откройте клапан 1 и введите промывочный реагент. Откройте клапан 1, установив его в положение 1 (нажмите [1.1], затем [STORE]). Введите 20 мМ Трис в петлю на 10 мл, соблюдая осторожность, чтобы не погнуть и не сломать иглу.
  6. Установите режим потока. Трижды нажмите кнопку [STEP BACKWARD] для перехода в режим потока (ML / MIN) и установите расход, нажав [4.0], затем [STORE].
  7. Закройте клапан 1. Нажмите кнопку [ШАГ ВПЕРЕД] для перехода в режим клапана и закройте клапан 1, установив его в положение 2 (как описано выше). Петля должна капать со скоростью 4 мл / мин.
  8. Повторить стирку. После промывки петли (~ 5 мин.) Извлеките шприц и повторите описанную выше процедуру промывания петли.

III. Колоночная хроматография S300

  1. Закройте клапан 1, наполните иглу и вставьте ее в порт инъекции. Нажмите кнопку [ШАГ ВПЕРЕД] три раза, чтобы перейти в режим клапана. Закройте клапан 1, введя [1.2], а затем [СОХРАНИТЬ]. Выньте шприц из порта для инъекции и заполните его биотинилированным образцом (10.5 мл).
  2. Откройте клапан 1 и введите пробу. Вставьте шприц в порт для инъекции и установите клапан 1 в положение 1. Введите образец в супер петлю и нажмите [КОНЕЦ]
  3. Установите стойку для сбора фракций. Заполните стойку для сбора крупных фракций 16 одноразовыми полипропиленовыми пробирками 17×100. Установите стойку на коллектор фракций. Выровняйте рычаг так, чтобы середина стрелки находилась напротив центра первой трубки.
  4. Установить коллектор фракций. Задайте размер дроби, нажав [РАЗМЕР ФРАКЦИИ], [4] и [СОХРАНИТЬ ВОЗВРАТ]. Установите размер фракции пика, нажав [PEAK FRAC. РАЗМЕР], [4] и [ВОЗВРАТ МАГАЗИНА]. Установите задержку, нажав [DELAY], [0.17] и [STORE RETURN].
  5. Запустите программу S300. Откройте компьютерную программу FPLC, чтобы запустить колонку S300. В главном меню программа находится в папке «S300» и называется «S300prep».
  6. Если у вас больше 10,5 мл образца, вы можете позволить программе работать менее 10 минут, приостановить программу на панели управления LCC500, временно установить клапан 1 в положение 1, ввести оставшийся образец (менее нескольких мл — общий объем должен быть менее 15 мл), верните клапан в положение 1 и возобновите программу.
  7. Свернутые белки MHC обычно элюируются с пиком около 200 мл. Вы должны объединить соответствующие фракции в полипропиленовую пробирку Falcon на 50 мл. Обычно это примерно 4 фракции.

IV. Замена трис-буфера Этот этап необходим для снижения концентрации соли при подготовке к хроматографии на колонке MonoQ.

  1. Добавьте весь образец в центрифужное фильтрующее устройство Amicon Ultra-15 (MWCO: 10k) и центрифугируйте при 3080 об / мин при 4 ° C, пока объем образца не достигнет примерно 500 мкл.Удалите фильтрат, собранный в нижней половине устройства (хотя вы можете сохранить его в пробирке на 50 мл, если нервничаете).

    НЕ ВЫБРАСЫВАЙТЕ БЕЛК В ВЕРХНЕЙ ПОЛОВИНЕ УСТРОЙСТВА.

  2. Заполните центрифужное фильтрующее устройство Ultra-15 20 мМ Трис (pH 8,0), тщательно закройте крышку, перемешайте переворачиванием и центрифугируйте при 3080 об / мин при 4 ° C, пока объем образца не достигнет примерно 500 мкл. Опять же, слейте фильтрат из нижней половины устройства.
  3. Повторите описанную выше замену буфера один раз.
  4. С помощью стеклянной пипетки Пастера осторожно перенесите концентрированный образец в пробирку Эппендорфа и центрифугируйте при 15300 об / мин в течение 15 минут при 4 ° C.
  5. Как можно быстрее приступайте к окончательной «полировочной» очистке белка MHC на MonoQ. Держите белок на льду, пока он не будет введен в колонку MonoQ.

Благодарности
Разработка протокола: лаборатория Альтмана.
Описание протокола: в значительной степени основано на версии, выпущенной Софией Олботт.

верх

Стадия 7: Получение тетрамера: Очистка MonoQ биотинилированных мономеров MHC / пептида

Препарат

  • Проверьте уровни буфера A (20 мМ Трис, pH 8) и буфера B (20 мМ Трис, pH 8 и 500 мМ NaCl).
  • Присоедините супер петлю объемом 2 мл к клапану 1.
  • Примечание. При работе на столе держите образец и все буферы на льду (~ 4 ° C).

Промывка петли

  1. Включите клавиатуру. Нажмите кнопку [manual] на FPLC, чтобы включить клавиатуру.
  2. Закройте клапан 1. Нажмите кнопку [шаг вперед] три раза, чтобы открыть режим клапана. Закройте клапан 1, установив его в положение 2, введя [1.2], а затем [store].
  3. Удалите иглу из порта инъекции. Иглу можно вынуть из порта инъекции только при закрытом клапане 1 (т.е. в положении 2). Запорный клапан 1 предотвращает попадание воздуха в линию и его последующую закачку в колонну.
  4. Вымойте, наполните и вставьте иглу в порт для инъекции. Тщательно промойте шприц объемом 3 мл 20 мМ Трис (pH 8). Наполните шприц 2 мл 20 мМ Трис (pH 8), удалите все лишние пузырьки воздуха и вставьте иглу в порт для инъекции.
  5. Откройте клапан 1 и введите пробу. Откройте клапан 1, установив его в положение 1 (нажмите [1.1], затем [сохранить]). Введите 20 мМ Трис в петлю на 2 мл, соблюдая осторожность, чтобы не погнуть и не сломать иглу.
  6. Установите режим потока. Трижды нажмите кнопку [шаг назад] для перехода в режим потока (мл / мин) и установите расход, нажав [4.0], затем [сохранить].
  7. Закройте клапан 1. Нажмите кнопку [шаг вперед] для перехода в режим клапана и закройте клапан 1, установив его в положение 2 (см. Инструкции выше). Петля должна капать со скоростью 4 мл / мин.
  8. Повторить стирку. После промывания петли выньте шприц и заполните его 2 мл 20 мМ Трис (pH 8,0). Повторите описанную выше процедуру для промывки петли.

Запуск образца белка

  1. Закройте клапан 1, наполните иглу и вставьте ее в порт инъекции. Нажмите кнопку [шаг вперед] три раза, чтобы перейти в режим клапана. Закройте клапан 1, введя [1.2], а затем [сохранить]. Извлеките шприц из порта для инъекции и заполните его 500 мл 20 мМ Трис (pH 8,0) и центрифугированным биотинилированным образцом из буферного обмена (концентрированным до 500 мл). Общий объем инъекции составляет 1 мл.
  2. Откройте клапан 1 и введите пробу. Вставьте шприц в порт для инъекции и установите клапан 1 в положение 1. Введите образец в супер петлю и нажмите [конец].
  3. Установите стойку коллектора фракций. Заполните стойку для сбора крупных фракций 42 одноразовыми полипропиленовыми пробирками объемом 1,5 мл. Установите стойку на коллектор фракций. Выровняйте рычаг так, чтобы середина стрелки находилась напротив центра первой трубки.
  4. Установить коллектор фракций. Задайте размер дроби, нажав [размер дроби], [1] и [сохранить возврат].Установите размер фракции пика, нажав [пиковая фракция. размер], [1] и [возврат магазина]. Установите задержку, нажав [delay], [0.34] и [store return].
  5. Запустить программу MonoQ. Откройте компьютерную программу FPLC, чтобы запустить столбец MonoQ. В главном меню программа находится в папке «MonoQ» и называется «MamuA11».

верх

Этап 8: Получение тетрамера: приготовление и хранение исходных биотинилированных мономеров

Буфер PBS

  • 35 мл 1X PBS
  • 35 мкл 1 мг / мл Леупептин
  • 35 мкл 1000X Пепстатин
  • 140 мкл 0.5M EDTA (конечная концентрация: 2 мМ)

PBS Замена буфера:

  1. Соберите фракции образца и центрифугируйте. Из фигуры MonoQ соберите правильные фракции и вылейте их в центрифужное фильтрующее устройство ultrafree-4 (MWCO: 10k). Центрифугируйте при 3080 g при 4 (C), пока весь собранный объем пробы не станет менее 1 мл.
  2. Добавьте буфер PBS и центрифуги. Добавьте буфер PBS в фильтрующее устройство ультра-свободной центрифуги и перемешайте путем переворачивания.Центрифугируйте до тех пор, пока объем образца не станет менее 500 мкл.
  3. Повторите описанную выше замену буфера один раз.
  4. Перенесите образец в пробирку Эппендорфа и храните на льду или при температуре 4 (C.
  5. Выполните УФ-сканирование образца. Разбавьте образец мономера в соотношении 1:50 или 1: 100 (конечный объем: 100 мкл) и выполните УФ-сканирование от 240 до 320 нм.
  6. Рассчитайте концентрацию мономеров. Это можно сделать, введя значения УФ-сканирования для 260, 280 и 320 а.е. в соответствующие разделы базы данных тетрамеров Альтмана.База данных рассчитает количество буфера PBS, которое нужно добавить к образцу мономера для достижения концентрации 2 мг / мл.
  7. Разбавьте образец мономера до 2 мг / мл буфером PBS.
  8. Аликвотировать мономеры до фракций по 100 мкл.
  9. Быстро заморозить мономеры и хранить при -80 ° C. Используйте жидкий азот для быстрого замораживания мономеров. Введите местоположение мономеров в базу данных «Tetramer Stocks».

верх

Шаг 9: Анализ биотинилирования

Процедура

  1. Добавьте 3 мкл разбавленного образца мономера (2 мг / мл) к 12 мкл 1X PBS (конечная концентрация: 0.4 мг / мл)
  2. Пометьте две пробирки Эппендорфа знаком «+» и «-» и добавьте 5 мкл указанного выше препарата мономера.
  3. Добавьте 5 мкл 0,8–1 мг / мл стрептавидина в пробирку с меткой «+».
  4. Добавьте 5 мкл ddh3O в пробирку с меткой «-».
  5. Инкубируйте оба образца при комнатной температуре в течение одного часа.
  6. Добавьте 10 мкл 2-кратного загрузочного буфера (невосстанавливающего) к каждому образцу.
  7. Не кипятите и не добавляйте DTT ни к одному из образцов.
  8. Приготовьте и запустите 12% гель SDS-page для образцов «+» и «-».
  9. Окрашивают гель 20% уксусной кислотой и 0,1% синим коммасси в 100% метаноле.
  10. Обесцвечивайте гель, используя 40% EtOH и 10% уксусную кислоту.

верх

Шаг 10: Тетрамеризация

Общие рекомендации по тетрамеризации Следующая информация является обобщением того, сколько меченого стрептавидина добавить к биотинилированным мономерам на последней стадии получения тетрамера. Фактическое количество добавляемого стрептавидина зависит как от молекулярной массы мономера, так и от процента биотинилирования.Необходимо разделить эту сумму на десять, чтобы получить сумму, добавляемую за интервал времени.

Процедура добавления стрептавидина через 10 интервалов времени разработана для максимального увеличения образования тетрамера. При раннем добавлении биотинилированный MHC будет в избытке и будет насыщать весь авидин. По завершении добавления стрептавидина может быть избыток авидина, однако предполагается, что большая часть MHC перейдет в тетрамеры. Если бы стрептавидин был добавлен за один раз и был в избытке, полученный раствор с большей вероятностью существовал бы в виде смеси мономеров / димеров / тримеров.

Этот подход кратко представлен на рисунке ниже.

  • После этапа 1 биотинилированный мономер присутствует в огромном избытке, и все сайты связывания биотина на добавленном стрептавидине заняты мономером MHC
  • После этапа 2 биотинилированный мономер все еще присутствует в избытке, и все сайты связывания биотина на добавленном стрептавидине заняты мономером MHC.
  • После шага 9 концентрации биотинилированного мономера и сайтов связывания биотина на стрептавидине почти идентичны.Обратите внимание, что для этого примера мы сознательно переоценили концентрацию биотинилированного мономера. Обычно мы пытаемся добиться «равнополярности» на шаге 10.
  • При добавлении стрептавидина на шаге 10 добавляется избыток стрептавидина, который остается свободным. Избыток стрептавидина не будет связываться с клетками при использовании в реакциях окрашивания. Конечно, он может увеличить фон окрашивания, но он не будет чрезмерным, поэтому его вклад в фоновый шум будет минимальным.

Теория
Наши стандартные условия хранения исходных биотинилированных мономеров: 100 мкл при 2 мг / мл, всего 200 мкг белка MHC.Для расчета количества добавляемого стрептавидина мы обычно предполагаем 100% биотинилирование. Даже если мы ошибаемся, худшее, что может случиться, — это потратить немного стрептавидина; это вряд ли добавит много фона.

Мы используем стрептавидин-PE (PJRS25) и стрептавидин-APC (PJ27S) от Prozyme. Их доводят до концентрации 1 мг / мл, что относится к общей массе конъюгата. Мы предполагаем соотношение стрептавидина к фикобилипротеину 1: 1 и рассчитали концентрацию сайтов связывания биотина в этих запасах.Это приблизительная оценка, но протокол сложения разработан для обеспечения хороших результатов, даже если наши оценки неверны. На практике мы обнаруживаем, что эта процедура очень надежна.

Протокол тетрамеризации
Добавление стрептавидина к биотинилированным мономерам проводят при комнатной температуре, при этом образцы хранятся в темноте между добавлениями (обычно в выдвижном ящике). Протокол, вероятно, также будет работать, если образцы хранятся на льду. Главное — добавлять стрептавидин небольшими частями и тщательно (но осторожно) перемешивать после каждого добавления.Приведенные ниже объемы стрептавидина подходят для аликвот 200 мкг биотинилированного MHC.

  • Streptavidin-APC (1 мг / мл):
    Добавляйте 17,4 мкл маркера в раствор мономера каждые 10 минут, всего 10 раз
  • Стрептавидин-РЕ (1 мг / мл):
    Добавляйте 31,8 мкл маркера в раствор мономера каждые 10 минут, всего 10 раз.

Эти объемы предназначены для мономеров MHC класса I в концентрации 2 мг / мл. Вы можете связаться с техническим директором для получения конкретных количеств конъюгата, которые следует добавить к вашим биотинилированным мономерам.

верх

Шаг 11: Примечания к номенклатуре тетрамеров

Когда вы сообщаете о результатах окрашивания тетрамерами, как вы должны относиться к тетрамеру, который вы использовали?

Было использовано много подходов, и нет идеального способа сделать это. Обычно это компромисс между номенклатурой, которая полностью и недвусмысленно определяет реагент, но которая поэтому является громоздкой, и сокращенной номенклатурой, которая неоднозначна и может «сломаться» со временем по мере описания новых эпитопов.Подход, который мы обычно используем, — это компромисс.

Соображения в номенклатуре тетрамеров

  1. Существует три компонента, которые определяют специфичность классического тетрамера MHC класса I: тяжелая цепь, бета-2-микроглобулин и антигенный пептид.
  2. Вид субъединицы b2m обычно не указывается в большинстве номенклатур тетрамеров. Компонент бета-2-микроглобулина можно сопоставить с видами тяжелой цепи, но чаще всего мы используем бета-2-микроглобулин человека, даже если тяжелая цепь принадлежит таким видам, как мышь.
  3. Назвать тяжелую цепь обычно просто. Для человеческих реагентов префикс «HLA» часто удаляется, а аллели обозначаются сокращенными названиями, такими как A2, B27, B57 и т. Д. Это можно сделать и для других видов приматов, хотя нередко включать префиксы, такие как «Mamu» для реагентов макака-резуса и «Patr» для реагентов для шимпанзе. Для реактивов мышей тяжелые цепи обычно обозначают с помощью таких терминов, как D (b), K (b), L (d) и т. Д.
  4. С самого начала название пептида часто было случайным и делалось осторожно.Например, в первой тетрамерной бумаге мы называем один реагент «A2 / gag». В контексте исходной публикации было очевидно, что это относится к белку gag ВИЧ, и большинство экспертов в данной области понимали, что это относится к иммунодоминантному эпитопу SLYNTVATL, который начинается с 77-й аминокислоты белка gag. Однако, оглядываясь назад, возможно, что другие эпитопы, ограниченные А2, могут быть обнаружены в gag, что делает нашу исходную номенклатуру неоднозначной. Как следствие, мы теперь отдаем предпочтение такой номенклатуре, как «A2 / ВИЧ.gag.77-85 «, который указывает патоген и источник белка эпитопа, а также его положение в последовательности. Конечно, даже эта номенклатура имеет свои недостатки, поскольку она длинная и не учитывает возможные мутации и т. д. ., но мы считаем, что это лучшее из плохого лота

верх

Безопасность | Стеклянная дверь

Мы получаем подозрительную активность от вас или кого-то, кто пользуется вашей интернет-сетью. Подождите, пока мы подтвердим, что вы настоящий человек.Ваш контент появится в ближайшее время. Если вы продолжаете видеть это сообщение, напишите нам чтобы сообщить нам, что у вас возникли проблемы.

Nous aider à garder Glassdoor sécurisée

Nous avons reçu des activités suspectes venant de quelqu’un utilisant votre réseau internet. Подвеска Veuillez Patient que nous vérifions que vous êtes une vraie personne. Вотре содержание apparaîtra bientôt. Si vous continuez à voir ce message, veuillez envoyer un электронная почта à pour nous informer du désagrément.

Unterstützen Sie uns beim Schutz von Glassdoor

Wir haben einige verdächtige Aktivitäten von Ihnen oder von jemandem, der in ihrem Интернет-Netzwerk angemeldet ist, festgestellt. Bitte warten Sie, während wir überprüfen, ob Sie ein Mensch und kein Bot sind. Ihr Inhalt wird в Kürze angezeigt. Wenn Sie weiterhin diese Meldung erhalten, informieren Sie uns darüber bitte по электронной почте: .

We hebben verdachte activiteiten waargenomen op Glassdoor van iemand of iemand die uw internet netwerk deelt.Een momentje geduld totdat, мы узнали, что u daadwerkelijk een persoon bent. Uw bijdrage zal spoedig te zien zijn. Als u deze melding blijft zien, электронная почта: om ons te laten weten dat uw проблема zich nog steeds voordoet.

Hemos estado detectando actividad sospechosa tuya o de alguien con quien compare tu red de Internet. Эспера mientras verificamos que eres una persona real. Tu contenido se mostrará en breve. Si Continúas recibiendo este mensaje, envía un correo electrónico a para informarnos de que tienes problemas.

Hemos estado percibiendo actividad sospechosa de ti o de alguien con quien compare tu red de Internet. Эспера mientras verificamos que eres una persona real. Tu contenido se mostrará en breve. Si Continúas recibiendo este mensaje, envía un correo electrónico a para hacernos saber que estás teniendo problemas.

Temos Recebido algumas atividades suspeitas de voiceê ou de alguém que esteja usando a mesma rede. Aguarde enquanto confirmamos que Você é Uma Pessoa de Verdade.Сеу контексто апаресера эм бреве. Caso продолжить Recebendo esta mensagem, envie um email para пункт нет informar sobre o проблема.

Abbiamo notato alcune attività sospette da parte tua o di una persona che condivide la tua rete Internet. Attendi mentre verifichiamo Che sei una persona reale. Il tuo contenuto verrà visualizzato a breve. Secontini visualizzare questo messaggio, invia un’e-mail all’indirizzo per informarci del проблема.

Пожалуйста, включите куки и перезагрузите страницу.

Это автоматический процесс. Ваш браузер в ближайшее время перенаправит вас на запрошенный контент.

Подождите до 5 секунд…

Перенаправление…

Заводское обозначение: CF-102 / 670ca34479ee8e2f.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *