Мышки из шишек поделки: Мышки из шишек, мастер — класс с фото, пошагово

Содержание

Мышки из шишек, мастер — класс с фото, пошагово

Почему только родители недолюбливают домовых мышей? Это же милейшие пушистые создания. Крошечную мышку с глазками в виде бусинок так хочется взять на руки, покачать, приголубить.

В отличие от людей мыши с удовольствием принимают человеческое соседство, точнее самостоятельно (без спроса) оборудуют норки в хозяйственных постройках, на чердаках и даже в квартирах. Пришла пора приютить дома мышонка, только не простого, а сделанного из шишки и пластилина.

Поделку можно считать абсолютно безвредной. Она не погрызет запасы семечек или твердый сыр. Значит, вперед за дело.

Для изготовления мыши понадобятся:

  • — одна закрытая сосновая шишка
  • — пластилин
  • — доска для лепки
  • — осенние ягодки и листочки для декора.

Отступив от правил, сегодняшнюю поделку начинают мастерить с конечностей животного. Поскольку нынче серый или коричневый пластилин у нас в дефиците, лапы грызуна будут белого цвета.

А почему нет? Ведь существуют белые породы – лабораторные мышки? Четыре удлиненных овала – это конечности поделки.

Дальше надо прикрепить лапки снизу шишки примерно так, как показано на снимке. При желании пластмассовым стеком мышонку оформляют пальчики.

Для головы понадобятся два больших плоских круга – уши, маленькие черные шарики – глаза, красный овал – язычок и коричневая капля – кончик носа. К сожалению, чешуики на верхушке сосновой шишки слегка приоткрылись, испортив внешний вид острой мордочки. Последняя деталь нужна для исправления неприятной ситуации.

После размещения пластилиновых элементов на голове, получается замечательная мышка.

Ниже размещены фото поделки с разными ракурсами.

Однако чего-то туловищу недостает. Вспоминаем, чем отличаются мелкие грызуны? Конечно, длинным хвостом. Вновь выручает кусочек белого пластилина и доска для лепки.

Наконец, мышка из шишки отправляется на поиск пищи. Она еще не знает, что осенью в лесу здорово не прокормишься.

Кусочка сыра грызуну не видать, а вот рябиновые ягоды можно попробовать. Пока зверек занят пищей, можно оформить вокруг осенний декор (разложить листья, принести орехов).

На этом мастер класс по изготовлению мышки закончен. Всем удачных идей, времени и возможностей для их реализации!

Поделка Мышка из шишки — Kidmade

2016-08-24

Мышка из шишки

У многих в доме живут маленькие пушистые друзья – коты и кошки. И все они без исключения любят, когда с ними играют. У домашних животных есть свои любимые игрушки: мячики, веревочки, бабушкины клубочки, бантики и многое другое. Но самой интересной игрушкой для любого кота является, конечно же, мышка. И если у вашего пушистика еще нет своей мышки, тогда скорее за работу. Сделаем мышку из шишки своими руками.

Приготовим для работы: нераскрывшуюся сосновую шишку, веревку-шпагат, ножницы, клеевой пистолет.

Пошаговая инструкция выполнения работы.

Шаг 1. Берем шишку и на ее верхушке закрепляем конец веревки-шпагата с помощью клеевого пистолета. Внимание! Мы работаем с электроприбором, поэтому заранее позаботьтесь о безопасности. Во-первых, около розетки, куда включен клеевой пистолет, не должно быть воды и легковоспламеняющихся предметов и разного мусора. Во-вторых, перед работой убедитесь, что подставка под пистолет надежно установлена и не мешает вашим движениям. Итак, конец веревки надежно приклеен к верхушке шишки.

Шаг 2. Начинаем постепенно наматывать шпагат на шишку. Наматываем плотно, не оставляем расстояние между слоями шпагата. Вначале веревку постоянно подклеиваем  клеевым пистолетом. Это необходимо, чтобы шпагат не соскальзывал с узкого конца шишки и не разматывался.

Шаг 3. Когда острый конец шишки обмотали шпагатом, делаем два мышиных ушка. Для этого наносим каплю клея на шишку  и закрепляем на ней небольшую петельку из шпагата. Точно так же на небольшом расстоянии делаем второе ушко. Шпагат при этом не разрезаем, а просто сгибаем.

Шаг 4. Продолжаем плотно наматывать ярусы шпагата на шишку. В самой широкой ее части достаточно будет закреплять шпагат клеевым пистолетом каплями клея в нескольких местах. Ближе к основанию шишки снова переходите к сплошному приклеиванию шпагата. Если этого не сделать, то веревка просто съедет с шишки. Когда шишка полностью будет обмотана шпагатом, считайте, что мышка для вашего котика почти готова. Отмеряем 4-5 см шпагата и отрезаем его ножницами. У нашей мышки замечательный хвостик.

Шаг 5. Если вы захотите использовать  мышку в качестве поделки, то можно приклеить глазки и носик. Для этого идеально подойдут бисеринки черного цвета. Нанесите три капли клея на мордочку мышки на месте глаз и носика и приклейте бисеринки. Вот и все. Правда, очень просто. Обрадуйте своего  пушистого домочадца. 

Назначеные фильтры

Навык
  • Воображение
  • Координация
  • Логика
  • Мелкая моторика
  • Память
  • Пространственное восприятие
  • Развитие речи
  • Словарный запас
  • Фантазия
  • Чувство цвета
Способности
  • Учебные и творческие
  • Умственные и специальные
  • Математические
  • Конструктивно-технические
  • Музыкальные
  • Литературные
  • Художественно-изобразительные
  • Физические
  • Уникальные

Галерея картинок

Похожие статьи

Животные из шишек поделки из природного материала

На весенние праздники, мы с семьей ездили на природу, младший сын со старшей дочкой насобирали там много шишек, деревья там растут разные, поэтому в их улове оказались и сосновые и еловые.

Молодых шишек еще нет, но с ёлок и сосен падают прошлогодние, хорошо сохранившиеся шишечки.

Посмотрев на шишку с разных сторон, сразу можно увидеть, что из неё может получиться, это отличный материал для поделок с детьми в этот раз мы решили сделать сову из еловой шишки и мышку из сосновой.

В ходе работы нам понадобилось:
Шишки, еловая и сосновая по одной штуке.
Пластилин: белый, черный и серый.
Серые шерстяные нитки.
Семена клёна.

Сначала мы сделали сову, для этого у еловой шишки, нужно удалить часть пластин сверху, что бы голова совы была ровная и снизу, что бы она была устойчивая.

Затем мы приступили к изготовлению глаз. Глаза у совы большие, красивые и выразительные, поэтому из белого и черного пластилина мы скатали по два шарика, черные шарики должны быть меньше, приплюснули их пальцем, приклеили один к одному, готовые глазки прикрепили к шишке.

Клюв и лапки сделали из черного пластилина, перед наклеиванием на шишку, к клюву прикрепили брови из семян клёна, по форме, они очень подходят для этих целей, конечно, лучше, если они будут сухие, но таковых у нас не нашлось и мы воспользовались зелеными.

Для того что бы сделать мышку, нам понадобилась сосновая, плохо распущенная, маленькая шишка. Из черного пластилина мы скатали три шарика, это глазки и носик, для ушек из серого пластилина два шарика, после чего, придавили их пальцем и прикрепили на голову мышки.

Хвостик мы сделали из небольшого кусочка серых шерстяных ниток.

Наша парочка готова. В природе, мышки являются добычей сов, но наша сова не такая, она добрая, мудрая и мышек не ест, поэтому мышка, её и не боится.

Польза от работы над поделками из природных даров, начинается еще на этапе сбора материалов, гуляя в лесу или парке, ребенок дышит свежим воздухом, знакомится с окружающей природой и происходящими в ней изменениями.

p.s. Не будь жадиной, поделись ссылкой на эту поделку с друзьями!

Поделки из шишек для детей своими руками, 10 мастер-классов — ISaloni — студия интерьера, салон обоев

Поделки из шишек для детей своими руками, 10 мастер-классов

Шишки являются экологически чистым природным материалом и имеют прекрасный запах хвои. Из них можно сделать огромное количество поделок, а преимущества детских поделок заключается в их оригинальности и простоте. В этой статье мы рассмотрим: как сделать детские поделки из шишек своими руками.

Блестящая птица

Вам понадобится: шишка, пенопластовый шарик, золотистые блёстки, клеевой пистолет, золотистый блестящий картон, ножницы, акриловая краска золотистого цвета, чёрные бусинки для глаз, золотистая бусинка для клюва, бежевая проволока.

Мастер-класс
  1. Покрасьте шишку и пенопластовый шарик золотистой краской и покройте блёстками.
  2. Дождитесь высыхания и приклейте шарик на плоскую часть шишки в качестве головы птички.
  3. Вырежьте из блестящего картона 4 крыла одного размера и склейте их между собой таким образом, чтобы получилось 2 крыла, которые блестят с обеих сторон.
  4. Вырежьте 4 заготовки из блестящего картона для хвоста по форме крыла, только меньшего размера и склейте их между собой таким способом, чтобы получилось 2 заготовки для хвоста, которые блестят с обеих сторон.
  5. Приклейте крылья.
  6. Приклейте хвост, расположив заготовки крест-накрест.
  7. Подготовьте отрезок проволоки и сформируйте лапки таким способом: сделайте 3 петли, скрутите проволоку, отложите заготовку в сторону и сделайте вторую лапку таким же способом. Скрутите 2 конца проволоки (заготовки лап) между собой, отрежьте лишнее и приклейте проволоку к шишке.

Блестящая птица из шишки готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

Паук из шишки

Вам понадобится: сосновая шишка, мягкая проволока коричневого цвета, ножницы, глазки для игрушек.

Мастер-класс
  1. Подготовьте 4 отрезка мягкой проволоки одного размера.
  2. Закрепите отрезки проволоки между чешуйками шишек, в качестве лап паучка.
  3. Приклейте глазки.

Паучок из шишки готов!

Сова из шишки и ваты

Вам понадобится: шишка, вата, фетр, ножницы, глазки для игрушек.

Мастер-класс
  1. Вставьте куски ваты между чешуйками шишек.
  2. Вырежьте из фетра клюв и круги для глаз, затем приклейте их к шишке.
  3. Приклейте глазки на круги из фетра.

Сова из шишки и ваты готова! Рекомендую к просмотру данное видео!

Заяц из шишки

Вам понадобится: шишка, фетр, ножницы, клей, глазки для игрушек, пуговка, ниточки для усиков, помпон для хвостика.

Мастер-класс
  1. Вырежьте из фетра по 2 заготовки для ушей 2х размеров.
  2. Склейте заготовки между собой и приклейте в качестве ушек.
  3. Нарежьте ниточку для усиков и прикрепите их к бусинке.
  4. Приклейте глазки и бусину с усиками к шишке.
  5. Приклейте помпон на место хвостика.

Заяц из шишки готов!

Птички из шишек

Вам понадобится: сосновые шишки, разная ткань, ножницы, простой карандаш, клей, глазки для игрушек.

Мастер-класс
  1. Нарисуйте на ткани лапки, клюв, крылышки, кружочек для животика.
  2. Вырежьте детали.
  3. Приклейте животик, крылышки, лапки, клюв и глазки к шишке.
  4. Сделайте нужное количество птичек таким же способом.

Птички из шишек готовы!

Лиса из шишки и пластилина

Вам понадобится: сосновая шишка, пластилин оранжевого, зелёного, белого и чёрного цвета, стек, осенние листья.

Мастер-класс
  1. Слепите ушки и вытянутую мордочку из оранжевого пластилина, скатайте чёрный нос и прикрепите все детали к шишке.
  2. Слепите язычок из оранжевого пластилина, затем прикрепите его.
  3. Слепите глазки из белого пластилина в форме полумесяца и прикрепите зелёные зрачки.
  4. Сделайте реснички из черенков – хвостиков листочков.
  5. Прикрепите глазки к шишке.
  6. Слепите 2 лапки и хвост из оранжевого пластилина и сделайте стеком надрезы, как показано на картинке.
  7. Прикрепите лапы и хвост к шишке.
  8. Выложите листочки и посадите лису.

Лиса из шишки и пластилина готова! Ещё больше детских поделок из шишек и пластилина Вы найдёте в этой статье.

Самолёт из шишки и пластилина

Вам понадобится: шишка, пластилин желтого, оранжевого, розового, чёрного, коричневого и фиолетового цвета, шпажка (деревянная тонкая палочка).

Мастер-класс
  1. Слепите 2 полосы из желтого и оранжевого пластилина и прикрепите их к шпажке.
  2. Скатайте шар из фиолетового пластилина и покройте им переднюю часть шишки.
  3. Прикрепите крылья самолёта.
  4. Слепите хвост из розового и коричневого пластилина и прикрепите полосу коричневого пластилина на фиолетовый.
  5. Слепите подставку самолёта.
  6. Скатайте шарики для глаз самолёта и украсьте его на свой вкус.

Самолёт из шишки и пластилина готов! Рекомендую к просмотру данное видео!

Цветы из шишек

Вам понадобится: шишки, хворост, акриловая краска разных цветов, кисточка, цветная бумага зелёного цвета, ножницы, клеевой пистолет, ваза.

Мастер-класс
  1. Покрасьте шишки в яркие цвета.
  2. Отложите их в сторону и дайте просохнуть.
  3. Возьмите хворост, отмерьте длину будущих стебельков, используя вазу.
  4. Отрежьте лишнюю длину хвороста.
  5. Покрасьте палки в зелёный цвет.
  6. Дождитесь полного высыхания.
  7. Вырежьте листочки из цветной бумаги.
  8. Приклейте листочки к палкам.
  9. Приклейте шишки на кончик палочки.
  10. Поставьте цветы в вазу.

Цветы из шишек готовы! Рекомендую к просмотру видео мастер-класс!

Дед Мороз из шишки

Вам понадобится: шишки, полимерная глина, клей ПВА, кисточка, суперклей, лак для волос, блёстки, тонкая проволока, лента.

Мастер-класс
  1. Сделайте шапку деда Мороза таким способом: скатайте из полимерной глины шарик, затем смастерите конус, загните кончик и прикрепите к шишке.
  2. Слепите 4 шарика из полимерной глины: один шар должен быть большим – из него слепите бороду. Два шара сделайте среднего размера – из них слепите усы, и один маленький шарик используйте для носа.
  3. Прикрепите детали к шишке.
  4. Проведите кисточкой по усам и бороде, создавая реалистичные полосы.
  5. Проденьте кусочек проволоки через шапку деда Мороза и скрутите петлю.
  6. Положите поделку в духовку на 15 минут (135 градусов), чтобы глина застыла.
  7. Вытащите поделку из духовки. Полимерная глина может отклеиться из-за высокой температуры. Если у Вас так произошло, не отчаивайтесь – просто приклейте отпавшие части.
  8. Привяжите ленту к проволоке.
  9. Сбрызните шапку лаком для волос.
  10. Посыпьте блёстками.

Дед Мороз из шишек готов!

Ёжик из пластиковой бутылки и шишек

Вам понадобится: пластиковая бутылка, шишки, краски, чёрная проволока, клеевой пистолет либо суперклей, ножницы.

Мастер-класс
  1. Отрежьте верхнюю и нижнюю часть бутылки, чтобы создать ёжика реалистичных размеров.
  2. Смажьте края частей бутылки клеем и вставьте друг в друга.
  3. Покрасьте всю заготовку чёрным цветом и дождитесь полного высыхания.
  4. Нарисуйте глазки белой краской.
  5. Покрасьте мордочку ёжика в серый цвет.
  6. Дорисуйте глазки, используя голубую и чёрную краску.
  7. Нарисуйте бровки чёрной краской.
  8. Отрежьте 2 кусочка проволоки и закрутите их под крышку в качестве усиков.
  9. Приклейте шишки таким способом, чтобы они плотно прилагали друг к другу.
  10. Закрепите поделку лаком.

Ёжик из пластиковой бутылки и шишек готов! Рекомендую к просмотру видео мастер-класс!

Рекомендую к просмотру фото-галерею идей для создания детских поделок из шишек!

Фантазируйте, экспериментируйте и создавайте оригинальные поделки своими руками. Ещё больше замечательных поделок из шишек Вы найдёте в этой статье.

Новогодние поделки ИЗ ШИШЕК (45 идей для детей).

Добрый день, сегодня я хочу показать какие интересные поделки можно сделать из шишек на Новый Год. Шишки – это бесплатные природный материал, который можно использовать для создания оригинальных украшений на елку.

Шишками можно декорировать новогоднюю сервировку стола. Новогодние крашеные красками шишки могут стать частью праздничной композиции в декоре дома на Новый Год. Многие поделки подойдут для детей. А также идеи для взрослого дизайна из шишек. Давайте посмотрим какие новогодние поделки можно создать своими руками на основе шишек (сосновых и еловых).

Игрушки-поделки
 из шишек своими руками.

 

Для тех кто умеет вязать (крючком или на спица), или шить из фетра не составит труда создать вот таких зимних человечков на лыжах или на санках. Тело человечков делаем из раскрывшейся сосновой шишки.  Голова из шарика от пинг-понга или маленького пенопластового шара, затонированого в гуашь бежевого оттенка. Лыжи делаем из палочек от мороженного, лыжные палки – простые зубочистки,  ручки из пушистой проволоки. Детское новогоднее творчество из природного материала — это хорошая идея для занятий дома или на уроках по труду и изодеятельности в школе.

По такому же принципу можно поставить на лыжи снеговиков или пингвинов.   Голова снеговика может быть из мехового белого помпона (как на фото новогодней поделки ниже). Или вы можете сделать голову из пенопластового шарика, из ваты (смешать вату с клеем ПВА и скатать круглый комочек, высушить и использовать как голову поделки-снеговика из шишки.

А вот авторские пингвины – маленький (из сосновой шишки) и большой (из длинной еловой шишки). Голова пингвина сделана из белого пенопластового шарика, который разрисовали черной гуашью. Наушники из проволоки, обмотанной шерстяной нитью и двух маленьких меховых помпонов. Черные крылья-лапки пингвинов вырезаны из фетра или формиама.

Можно сделать из сосновых шишек целую стайку пингвинов в красных новогодних колпачках.. Крылышки пингвинам можно сделать из черного пластилина, или кусочков древесной коры (как на фото ниже). Детям понравится такая поделка своими руками.

А если к круглой сосновой шишки приклеить большие круглые глаза и нос-крючок – то мы получим СОВУ. Крылья делаем из фетра, или формиама, или из кусочка кожи (кожзама). Колпачки для совы можно склеить из ярких бумажных салфеток  с новогодним рисунком (так наши совы из шишек будут празднично выглядеть).

Если вы купите кусочки фетра (он продается листами, как бумага, и можно купить небольшие листы разных цветов) – то вы можете создать целую серию забавных новогодних зверят на основе шишки.

Игрушки-подвески из шишек
На елку своими руками.

А вот еще идея для нового года, где из шишек сделаны подвески для украшения новогодней елки. Здесь все сделано по принципу – внизу шишка, вверху голова персонажа. Головастые шишки — поделки своими руками, доступные для занятий с детьми.

Самое простое это взять пенопластовый шар, на него наклеить нос и глаза пуговки. Нос можно вырезать из толстого кусочка оранжевого фетра. Или нос можно вылепить из ваты намоченной в клее ПВА, при застывании такая пва-вата становится твердой как дерево (удобный материал для поделок, тем более что в клей пва можно подмешать любой цвет гуаши и мы получаем не только прочную деталь, но и нужного для вас цвета).

С помощью фетра или пушистой проволоки у шишки могут появится крылышки, и тогда такую поделку можно будет оформить как ангела или фею.

Новогодние персонажи,
сделанные из шишек.

 

Если шишку покрасить гуашью в красный цвет, то получится основа для поделки Дед Мороз. Красить шишку лучше не кисточкой. А сразу целиком окунув в пластиковый стаканчик с краской. В стаканчик наливаем клей ПВА – добавляем туда красную гуашь. Шишку целиком окунаем в это красящее мессиво.

Важно! Экономьте ваши деньги. Не покупайте ПВА в маленьких тюбиках в канцтоварах. Ступайте с строительный отдел магазина и покупайте ПВА в литровом ведерки (по цене это будет раза в 4-7 дешевле).

Очень красиво смотрятся поделки из шишек, в которые добавлены элементы красного цвета – ленточки, бусины, фетр. Это отличные идея для новогодних детских поделок из шишек — и просто и быстро и легко для ребенка.

Также вы можете сделать РОЖДЕСТВЕНСКИЕ поделки из шишек и другого природного и подручного материала. В качестве крыльев у ангелов можно использовать пышные ленты, кружевные узоры. Можно связать ажурные крылья ангела крючком своими руками, если вы когда либо вязали салфетки. Можно из шишек и кусочков фетра (или флиса) сделать целую рождественскую сценку с новорожденным младенцем Иисусом в люльке.

 

Декоративные новогодние шишки
Своими руками.

А вот образцы поделок с шишками, декорированными на новый год. В качестве декора  используем веточки хвои от елки, зеленые листики от  комнатных растений, или вырванные из букета, маленькие шишечки ольхи, кусочки мха, бусины, шарики, бубенчики, яркие ленточки и блестящую бумагу.

Очень красиво и празднично смотрятся декорированные шишки, которые предварительно покрасили (окунув в стаканчик с крашенным клеем ПВА). После покраски и высыхания шишку надо побрызгать лаком для волос – цвет станет ярче и шишка начнет блестеть как глянцевая. И еще на мокрую от лака  шишку можно быстро посыпать блестки (подходит посыпка для ногтей).

В поделочном магазине вы можете купить маленькие фигурки птичек. Они отлично будут смотреться  не верхушке вашей новогодней шишки. Птицам можно свить гнездышки из елочной хвои, украсить их красными бусинами.

А еще сами шишки можно декорировать бусинами от бус, или маленькими шариками-помпонами, просовывая их между чешуйками и фиксировать на термоклей.

И еще шишки можно сложить вместе – в звездочку-снежику.  Шесть снежинок раскладываем на столе – попками вместе – кончиками врозь. И склеить их горячим термо-клеем из пистолета.  Место склейки прикрываем снежинкой, вырезанной из картона, еловыми лапками, бусинами или маленьой шишечкой (кончиком отрезанным от большой шишки).

 

Новогодние поделки
из ЧЕШУЕК шишки.

А вот интересный способ делать поделки из шишек на новый год. Если взять и из шишки выдернуть чешуйки. То из них можно (как из природных пазлов) собрать любой узор или объемную форму.

Например, вырезаем из картона звезду. И раскладываем на клей чешуйки по контуру этой звезды, постепенно, ряд за рядом, подбираясь к середине. Такая поделка понравится детям школьного возраста — только чешуйки нужно надергать заранее.

Можно просто на круглый кусочек картона выложить цветок из чешуек шишки. Начинать тоже нужно С КРАЕВ картонного кружочка, и ряд за рядом дойти до середины цветка. К обратной стороне цветочка наклеиваем кружево из ткани или снежинку из бумаги. Получаем нарядную ажурную поделку на Новый Год.

А также чешуйками от шишки можно украсить бумажный конус. Так мы получим поделку-елочки из природного шишечного материала (как на фото ниже).

А вот еще интересная новогодняя поделка. Берем пакеты от молока (маленького размера). Красим их в белую гуашь, и рисуем поверх черные полосочки (имитируем окраску березовой коры). В одном из боков коробки прорезаем круглую дырочку.  А верх молочной коробки (она по форме как домик-крыша) обклеиваем шишечными чешуйками на горячий термо-клей из пистолета.

И получаем вот такую (фото ниже) новогоднюю поделку в виде птичьих домиков. Очень красиво и необычно.

А также чешуйкаи можно обклеить пенопластовый животик снеговика – одеть на него такую шубку из шишек. Красивая поделка для старших детей.

 

Шишки на венках
и новогодние панно на стену.

 

Очень интересные декоративные  панно можно делать из шишек.  Если из реек сколодить любую форму (например звезду), то можно ее обклеить  шишками —  и получится оригинальная новогодняя поделка, которую можно повесить на стену, прислонить к стене рядом с елкой.  Можно эту шишковую звезду обмотать гирляндой, сделать подсветку лампочками.

Вооружившись клеем из пистолета вы можете собрать из шишек ажурную поделку-снежинку. И тоже использовать ее как панно на стену.

А если у вас маленькое количество шишек, вы можете сделать настенное панно из другого природного материала, и шишки использовать как дополнительное украшение.

Рождественские венки тоже можно делать из шишек.  Для этого их можно покрасить в любой цвте (окунуть в клей-пва, подкрашенный гуашью, или покрыть краской из баллончика).

Венок делаем на основе деревянного или картонного кольца. Шишки крепим на кольцо-основу с помощью клея.

 

 

Новогодние композиции
С шишками.
для украшения стола.

 

Также шишки могут стать частью новогодней композицией, украшающей ваш праздничный стол на Новом Году. Вы можете просто разложить крашенные шишки на столе между блюдами и бокалами. Или можете из подвесить на люстре за яркие ленточки или подвесить на край стола (как на фото ниже).

Также можно из шишек сделать сервировочную бутоньерку для украшения тарелки каждого гостя.

Красиво смотрится если под цвет шишки подобрать такой же цвет блестящей посыпке. Заставить шишки сверкать и искриться как морозные узоры на зимнем окне.

Вы сами можете придумать различные композиции с шишками и другим материалом.   Ваша фантазии интересные «ненужные штучки» найденные в ящике вашего стола могут стать источником оригинальных эксклюзивных поделок из шишек своими руками.

Подсвечники с шишками
Своими руками.

Точно также в вашу настольную новогоднюю композицию из шишек можно включить свечи.  Можно просто в красивом блюде расставить свечи и вокруг разложить шишки, покрашенные в оттенки близкие к цвету свечей.

Если вы делает поделку, где все шишки склеены друг с другом, то при сборке такой клеевой шишечной кучи вставьте внутрь отрезки пластиковых трубок – в эти места вы сможете вставить свечи. При склейке позаботьтесь о том, чтобы трубочки-подставки под свечи были вклеены строго вертикально – иначе свечи у вас будут стоять не ровными столбиками а в кривь и вкось.

Можно поступить проще. На картонный кружок поставить стакан. И вокруг него по картону на клей прикрепить шишки, сосновые ветки, ягодки, звезды вырезанные из березовой коры и кожуры апельсина.

То есть для создания подсвечника подойдет любой способ декора. Либо ставим свечу внутрь кольцао из шишек и природного материала. Либо клееим (привязываем ленточкой ) природный материал к телу самой свечи. Либо ставим свечу внутрь высокого стакана и вокруг нее прямо в стакан просовываем шишки и прочую мишуру (как на третьем фото ниже).

 

 

Новогодние елки-поделки
Из сосновых шишек.

А также ваши новогодние композиции из шишек могут быть оформлены как высокие ЕЛКИ-ПИРАМИДКИ.  Такие елочки можно сложить из обычных шишек, из крашенных в золотую краску из баллончика. И украшать их можно лентами, цветами из фетра, мелкими елочными шарами (тоже приклеивать их термо-клеем).

Вот такие идеи у меня для Нового Года 2018. Пусть вас вдохновят эти работы. И пусть ваши шишки расцветут поделочными идеями в ваших умелых руках.

Удачного вам новогоднего творчества.

Ольга Клишевская, специально для сайта «Семейная Кучка»
Если вам нравится наш сайт, вы можете поддержать энтузиазм тех, кто работает для вас.
Поздравить с Новым Годом автора этой статьи Ольгу Клишевскую.

Читайте НОВЫЕ статьи на нашем сайте:

на Ваш сайт.

Поделки из шишек для детей — Поделки для детей

Поделки из природных материалов, а именно из шишек, представляют большую ценность для развития детей! Подобное творчество учит ребенка как из простых вещей можно создавать уникальные творения используя только свои руки и фантазию. Развивает воображение и навыки мелкой моторики.

В данной статье я хочу рассказать Вам какие удивительные, живые и оригинальные поделки из шишек можно сделать с детьми. И расскажу маленький, но очень важный СЕКРЕТ, как сделать шишки более красивыми и долговечными!

Итак, начнем с секрет красивых шишек! Вы не поверите, но их надо испечь!

1. Разогрейте духовку до 250 °.

2. Постелите на лист для выпечки алюминиевую фольгу.

3. Разложите шишки на противне в один слой.

4. Выпекайте в течение 30-45 минут.

5. Выньте горячие шишки из духовки, используя щипцы. Дайте им отлежаться в течение 24 часов, спустя это время можете приступать к творчеству.

Поверьте мне, после этой процедуры шишки действительно становятся красивее, они выглядят естественнее, полностью открываются и сохраняют свою форму. Кроме того высокая температура убивает мелких насекомых, которые со временем могут уничтожить красоты шишки .

Моим детям больше всего нравится делать из шишек животных и человечков, гномиков, фей, если все грамотно сделать и хорошо закрепить детали, то играть с ними можно довольно долго.

Гномик или человечек из сосновой шишки — типичная поделка для вальдорфского детского сада:

Ангел из шишки — украшение на рождественскую ёлку.

Сова из шишки. Глаза и крылья из фетра, приклеены на клей-пистолет.

Поделка из шишки и перьев — Лебедь.

А вот ещё один, не менее прекрасный, лебедь из шишки, крылья и хвост также сделаны из перьев, а в качестве головы и шеи используется синельная проволока.

Подобным образом мы делали животных из шишек и пластилина.

А эти забавные мышата сделаны из еловых шишек и орехов. Чудесные!

Отличное применение шишек — это кормушка для птиц. Шишку обмазывают клейкой основой (арахисовое масло, сливочное масло или маргарин) и обваливают в корме для птиц или любой крупе. Такие кормушки актуальны в холодное время года. Готовые шишки подвешивают на ветки деревьев.

Ну, и не стоит отрицать, что шишки это отличный элемент декора. Из них можно сделать рождественский венок на дверь, украсить новогоднюю ёлку или окно.

               

Желаю Вам творческих успехов!

Поделки из шишек

Поделки из шишек

Очень многие любят ходить в лес за грибами. А любите ли вы ходить за шишками? Зачем это надо? Потому что из шишек можно смастерить очень много интересного и красивого. В нашей местности наиболее распространены еловые и сосновые шишки. Больше всего по форме шишки напоминают туловище и части тела животных и человека. Поэтому они представляют собой прекрасный материал для изготовления объемных поделок своими руками.

Для изготовления поделок из шишек подойдут как раскрывшиеся, так и нераскрывшиеся шишки, в зависимости от замысла.

Для скрепления деталей поделок из шишек между собой можно использовать клей или пластилин. Пластилин больше подходит для работы с маленькими детьми. Дети старшего дошкольного и младшего школьного возраста могут работать с клеем.

1. Поделки из шишек. Поделки из шишек и пластилина

Принимать участие в создании поделок из шишек могут даже 2-3-летние малыши. Из шишек сделайте туловище и голову вашим поделкам, все недостающие детали можно слепить из пластилина, дорисовать маркером, либо сделать из веточек, листочков, желудей, перьев и т.д.

Человечки из желудей и сосновых шишек.

Популярными являются осенние поделки из шишек и желудей. Из шишки делают туловище, из желудя — голову.


У лыжников на фото выше лыжи сделаны из палочек для мороженого, покрашенных краской. Ручки — из синельной проволоки.

Вместо желудя при изготовлении головы можно использовать деревянные бусины. Одежду человечкам лучше всего сделать из фетра. Для скрепления деталей поделок из шишек между собой, удобнее всего использовать клеевой пистолет.


Ежик из шишки и сосновых иголок.

Чтобы сделать такого симпатичного ежика из шишки, надо под чешуйки сосновой или лиственничной шишки при помощи зубочистки и пластилина прилепить пучки сосновых иголок. Потом их можно чуть-чуть подстричь, а можно и оставить, но тогда это будет уже дикобраз. Мордочка у ежика сделана из пластилина, носик из горошка черного перца. Прикрепите на иголки ежику ягоды рябины и самодельные грибочки из веточек, пластилина и шляпок от желудей. Этого ежика мы нашли на замечательном сайте Kokokokids.ru


Кстати, можно сделать ежика из шишки еще проще. Такая поделка из шишек и пластилина под силу дошкольнику.

С ребенком школьного возраста можно сделать поделку из шишек ежика посложнее. Вам понадобятся: большое количество раскрывшихся сосновых шишек, ненужная тарелка (миска), крышки от бутылок, бутылка пластиковая, клей «момент» (или любой другой), скотч, краска. Подробный мастер класс по изготовлению этой осенней поделки из шишек см. по ссылке >>>>



Как вы, наверно, уже поняли, из шишек и пластилина при наличии фантазии можно сделать большое количество поделок. Вот примеры только нескольких детских поделок из шишек и пластилина.

— поделки из шишек «Заяц»

— поделки из шишек и пластилина «Черепашка»

Сделать эту поделку из шишки и пластилина довольно просто, но на первом этапе — подготовке шишки — ребенку потребуется помощь взрослого. Кусачками или ножом надо будет отрезать верхнюю часть хорошо раскрывшейся сосновой шишки. Это будет панцирь черепашки. После этого ребенок из пластилина должен будет слепить черепашке голову, лапки, глаза и хвостик.

— поделки из шишек для детского сада «Лебедь»

Очень просто сделать из сосновой шишки и пластилина лебедя. Для этой поделки из природного материала вам также потребуется небольшой кусочек ваты.

— поделки из шишек своими руками «Крокодил»

Из нераскрывшихся сосновых шишек можно сделать симпатичного крокодила. Для правдоподобия покрасьте шишки перед началом работы в зеленый цвет гуашевой краской.

Для изготовления поделок из шишек можно использовать также перья, кукольные глазки, наполнитель для мягких игрушек, синельную проволоку (т.н. «пушистую» проволоку), фетр и др. материалы. Вот еще фото удачных поделок из шишек для детей.
2. Поделки из шишки своими руками. Поделки из шишек своими руками

Поделки из шишек хорошо подходят для украшения дома к Новому году и Рождеству. Их можно повесить на новогоднюю елку вместо игрушек

или украсить ими квартиру.


Из шишек можно сделать новогоднюю гирлянду,
а еще украсить ими новогодний подарок.

Положите покрашенные акриловыми красками шишки в стеклянную вазу, получится красивое и необычное украшение для дома.

Еще одно новогоднее украшение из шишек для дома — веточки деревьев, украшенные небольшими сосновыми или пихтовыми шишками. Шишки можно покрасить краской (белой, золотой, серебряной) или оставить как есть. Поставьте веточки в стеклянную вазу, которую тоже заполните шишками и маленькими елочными шарами.

Также из шишек можно сделать оригинальные подсвечники. При изготовлении второго варианта подсвечника из шишек был использован ненужный диск (CD или DVD). Подробную инструкцию по изготовлению этой поделки из шишек см. по ссылке >>>>


Если на картонную основу в форме круга приклеить шишки разной формы и размера, то получится новогоднее украшение — венок. Правда, шишек потребуется очень много, поэтому запаситесь ими заранее. Готовый венок можно покрыть краской.
Много шишек вам понадобится также в том случае, если вы захотите сделать еще одну оригинальную поделку из природного материала — елку из шишек.

Чтобы смастерить такую красавицу, сделайте основу в форме конуса из картона или любого другого подходящего материала, после чего обклейте ее шишками. Подробный мастер класс по изготовлению елки из шишек см. по ссылке >>>>

С малышами можно сделать мини-елочку из раскрывшейся сосновой или еловой шишки. Прикрепите шишку к подставке и пусть малыш украсит ее разноцветными пластилиновыми шариками или маленькими помпончиками.


3. Поделки шишки. Поделки из шишек фото

Хотим поделиться с вами еще двумя интересными поделками из шишек от сайта Страна Мастеров.

Корзина из сосновых шишек.

Для изготовления этой поделки из природного материала шишек надо собрать побольше, чтобы потом подбирать их по размеру. Шишки должны быть раскрытые. На фото корзинка заполнена цветами, но если украсить ее осенними листьями и гроздями рябины, то получится замечательная осенняя поделка. Подробную инструкцию по изготовлению корзины из шишек см. по ссылке >>>>

Дерево из шишек.


Ссылка >>>>

4. Поделки из шишек для детей. Поделки из шишек для детского сада

Поделки своими руками можно делать не только из самих шишек, но и из их чешуек. Разбирать шишки на чешуйки удобно при помощи кусачек.

Еловыми и сосновыми чешуйками можно обклеить семейные фотографии, чтобы потом украсить ими новогоднюю елку. Красиво смотрятся такие новогодние украшения в сочетании с елочными игрушками из шишек.


Из чешуек от шишек получаются замечательные цветочки. Делать такие поделки из природного материала очень просто. Надо сначала при помощи кусачек разделить шишку на чешуйки, после чего приклеить из на кружок из картона. Удобней всего при этом пользоваться клеевым пистолетом. В центр цветочка можно приклеить бусинку для красоты. Из таких цветов можно потом сделать гирлянду.

ссылка-1 >>>>
ссылка-2 >>>>

Из чешуек от еловых шишек и палочек для мороженого получится необычная поделка под названием «Цветы для мамы». Инструкцию по изготовлению этой поделки из природных материалов читайте по ссылке >>>>



А еще, если обрезать «попочку» у сосновой шишки, то можно сделать из нее вот такой цветочек, который может служить брошкой или бутоньеркой.
Неувядающий букет цветов можно сделать из сосновых шишек. Для этого кусачками надо разрезать их по слоям и покрасить акриловыми красками.


Материал подготовила: Анна Пономаренко

http://adalin. mospsy.ru/l_03_00/l0227.shtml

Детские поделки из шишек 68 идей для вдохновения!

Здравствуйте! Меня зовут Елена Крассула, я автор добрых стихов для детей и сайта Главные люди. ЖЕЛАЮ ВСЕМ НАМ МИРА и ДОБРА, ЗДОРОВЬЯ НАШИМ ДЕТЯМ.


Можно написать — [email protected] 
Обо мне и о сайте — Главные-люди.рф…

Знакомьтесь — моя любимая доченька Аленушка!

Моя первая книжка — «Волшебная книга мечты»!


Детские мечты в стихах и рисунках

ВАШЕ ТВОРЧЕСТВО НА МОИ СТИХИ — песни, конкурсы, мультфильмы:


Смотрите все ВИДЕО…


Наши авторы! Сказки, рассказы, истории, стихи, написанные детьми — Дети авторы

Для Вашего ребенка это будет интересно! Сказки моего отца — Современные добрые сказки детям!

Читайте добрые стихи детям! 


Детские стихи мамина любовь


Детские стихи мечты и чудеса


Стихи для родителей о детях и для детей о детях и родителях


Стишки малышки


Стихи для детей о вкусной и полезной пище


Добрые детские стихи про животных


Стих сериал для девочек


Детские стихи о солнышке, лете и тепле


Детские стихи про игрушки


Стихи Мы любим рисовать!


Стихи детям о зиме и севере


Загадки в стихах

Вечер можно провести ВМЕСТЕ, весело и полезно — идеи детских поделок:


Елочные шары своими руками


Новогодние поделки из фетра


Новогодние поделки из природных материалов


Елочные игрушки своими руками


Новогодняя елка идеи поделок


Новогодние поделки из шишек


Красивые поделки из природных материалов


Поделки из лампочки своими руками


Венок на дверь из помпонов


Поделка мягкая игрушка кукла своими руками мастер класс


Мягкая игрушка Русалочка своими руками мастер класс


Енот и обезьяна — мягкая игрушка из носков своими руками


Гирлянда из фетра своими руками мастер класс


Как сделать помпоны из ниток своими руками мастер класс


Поделки из шишек для детей


Поделки из втулки туалетной бумаги…


Поделки из грецких орехов


Красивый ободок с цветком из атласной ткани своими руками


Простой ободок для волос из ткани

Эти и многие другие интересные идеи для детского творчества найдете в рубрике Идеи детских поделок…

Добрая анимационная фотогалерея для детей — смешные анимашки животные и дети!

Улыбнитесь! Смешные и добрые картинки анимашки с животными!

Такие милые! Фото анимашки с животными…


Украшение детских блюд — Идеи оформления детских блюд…


Намечается веселый детский праздник? Идеи украшения стола на детский день рождения!


Добрая фотогалерея детям 
Живая планета…


Дети на картинах художника Дональда Золана…


Маленькие детки на картинах Рут Морхэд


Смешные животные на картинах Джой Кэмпбелл


Фотогалерея Дари добро —
Добрые картинки для детей

Сказочно красивые детские иллюстрации!

Поделки из шишек своими руками для 1 класса

Осенняя пора – это самое благоприятное время, чтобы использовать для поделок природный материал, ведь найти его можно в любом парке, сквере и в лесу.

В этой статье мы подготовили для вас подборку не сложных и интересных мастер классов, которые позволят вам вместе с вашим ребенком сделать оригинальные и красивые детские поделки из шишек своими руками.

Мастер классы не сложные, а значит прекрасно подойдут для творческих занятий с детьми дошкольного и младшего школьного возраста.

Поделки из шишек своими руками для 1 класса

Мышка из шишки своими руками

Вот такую милую и забавную мышку можно сделать своими руками, если использовать в качестве материалов грецкий орех, шишку, фетр.

Для начала удалите часть шишки с ее тонкой стороны. Щепки используйте для создания ушек.

Приклейте грецкий орех к шишке.

Носик мышке можно сделать из черной бусинки.

Глазки нарисуйте черным маркером.

Хвостиком может быть тонкая веточка, черенок листика или кусок проволоки.

Лапки сделайте из фетра.

Видео мастер класс — Мышка из шишки своими руками

 

Медведь из шишек своими руками

Интересная поделка из природного материала – Медведь из шишек.

Дополнительный материал, который вам будет необходим – желуди, горячий клеевой пистолет, зеленая двусторонняя бумага, крышка от пластиковой бутылочки, кукольные глазки.

Из крышки и комка зеленой бумаги сделайте подставку для будущей поделки.

Тело мишки – это большая длинная шишка, ноги, уши и мордашка – шляпки желудей, лапы – разрезанный желудь.

Все детали приклеивайте горячим клеевым пистолетом.

Не забудьте про кукольные глазки и носик из черной бусинки.

Видео мастер класс — Медведь из шишки своими руками

 

Цветы из шишек своими руками

Мастер класс

Самая простая, но при этом очень красивая и эффектная – это цветы из шишек.

Для изготовления таких экзотических цветов вам будут необходимы следующие материалы: шишки, акриловые краски, зеленый картон.

Подберите шишки, которые своей формой будут напоминать бутоны цветов.

Разукрасьте шишки акриловыми красками.

Из зеленого картона вырежьте подставку в виде колечка с вырезанными листиками. Разукрашенную шишку поставьте внутрь картонной подставки.

 

 

 

 

Белочка из шишки своими руками

Мастер класс

Для изготовления следующей поделки вам будут необходимы – длинная шишка, пластилин, кукольные глазки.

Из пластилина вылепите тело будущей белочки, а ее роскошным и пышным хвостом будет красивая шишка.

 

Ежик из шишек своими руками

Мастер класс

Еще одна простая детская поделка с использованием шишек и пластилина – ежик.

Мордочку и лапки ежику сделайте из пластилина, а иголками будет красивая маленькая шишка.

Поделка-конус из бумажной мышки — занятия для детей

Сообщение от: Тереза ​​Джонстон в ремеслах животных, Китайский Новый год 2726 просмотров

Это очень простая и недорогая забавная поделка для детей. Используйте цветную бумагу, чтобы сделать маленьких и больших мышей. Используйте бумагу для принтера, чтобы распечатать их, затем либо проследите на цветной бумаге, либо просто используйте цветную бумагу для принтера. Этот бумажный конус для мышки — забавная поделка, которую можно использовать вместе с вашей любимой книгой о мышах, например, с моей любимой «Если дать мышонку печенье».Также используйте этих маленьких бесшерстных существ в год Крысы (Мыши) для поделки на китайский Новый год.

Что вам понадобится

Как сделать бумажный конус для мыши

  • Распечатайте печатный шаблон мыши A (печать 2 больших мышей) или печатный шаблон мыши B (печать 1 большой и 1 маленькой мыши) на белой или цветной бумаге для принтера. Если выкройка напечатана на белой бумаге, вырежьте ее и обведите на цветной плотной бумаге.
  • Чтобы добавить глаза для мыши, используйте Google Eyes или раскрасьте их черным маркером. Усиление белой дыры также может быть добавлено для глаз, как показано на рисунке.
  • Проделайте отверстия для ушей и хвоста, где показано. Или используйте бумажные уши, которые есть на распечатках, и приклейте их в указанном месте.
  • Возьмите примерно 2-дюймовый отрезок стебля синели для каждого уха, скрутите его, чтобы получилась петля, а затем скрутите концы вместе. Вставьте скрученные концы в пробитое отверстие и согните их на месте.Закрепите скрученный конец кусочком скотча.
  • Сверните бумагу так, чтобы из двух плоских сторон образовался конус. Слегка наложите концы друг на друга и склейте их вместе.
  • Возьмите последнюю часть стебля синели и сделайте хвост для мыши, прикрепив его скотчем к основанию бумажного конуса.

Вам понравилось это печатное задание для детей? Чтобы узнать больше, подписывайтесь на нас в Twitter, Facebook и Pinterest

. поделки мышки 27.06.2017

Мышиное ремесло ⋆ Сахар, специи и блеск

Добро пожаловать в Sugar, Spice & Glitter! Моя рассылка — лучший способ быть в курсе наших вкусных рецептов, интересных детских мероприятий и советов путешественникам.Обратите внимание, этот пост может содержать партнерские ссылки. Для получения более подробной информации см. наше Полное раскрытие информации.

С возвращением в Sugar, Spice & Glitter! Моя рассылка — лучший способ быть в курсе наших вкусных рецептов, интересных детских мероприятий и советов путешественникам. Обратите внимание, этот пост может содержать партнерские ссылки. Для получения более подробной информации см. наше Полное раскрытие информации.

Во время нашего исследования отряда Золушки мы сделали пару поделок, но моей любимой должна быть эта поделка мыши , о которой я сначала немного сомневался.

Ни за что не могла придумать поделку Золушка для детей, пока мой друг не предложил поделку мышки! Я сделал эту пальчиковую куклу мыши , когда был ребенком, поэтому заслуга принадлежит моей воспитательнице в детском саду, мисс Браун!

Я беспокоился, что эта поделка с мышью будет недостаточно открытой, но дети удивили меня, придумав свои интерпретации, используя подготовленные материалы, прежде чем я успел показать им, как собрать задуманную поделку с мышью.

Я собирался сделать пальчиковую куклу-мышь , но мне понравились более плоские версии, которые двое детей сделали по собственному желанию. Любая поделка с мышью будет отличным вариантом — кукла-мышка станет хорошим испытанием для детей, развивающих мелкую моторику.

Материалы для изготовления мышей:

Я разложила эти материалы для детишек и сразу двое из них разложили расходные материалы на форме сердца, чтобы сделать мордочки мышек.Мне понравилась их интерпретация, и я помог им использовать войлочный клей, чтобы прикрепить черты лица.

Третий ребенок ждал, и я показала ей, как сделать поделку из пальчиковых мышек, которую я помнила с детства.

Вы можете сделать поделку-пальчик-мышку просто в виде конуса или оставить небольшие зазоры в нижней части поделки-мыши, чтобы пальцы вашего ребенка могли торчать, однако при игре с поделкой они должны быть осторожными если только он не был зашит, а не приклеен.

Надеюсь, вам понравилась эта простая мышка! Вы можете ознакомиться с оставшейся частью нашего исследования Золушки здесь или посмотреть другие наши поделки здесь!

PS — если вам это понравилось, вам может понравиться:

Легенда о сосновой шишке пихты Дугласа

Давным-давно, когда земля была молода, стояла очень высокая и гордая ель Дугласа. Ель была такой высокой, что ее самые верхние ветви касались облаков. Ветви широко раскинулись и обеспечили защиту маленьким растениям и животным внизу.У ели было много шишек на концах открытых ветвей, в которых было много семян. Маленькая мышка жила под защитой раскидистых ветвей дерева.

Была долгая и холодная зима, когда лежал глубокий снег и ветер дул по земле. Пихта Дугласа стояла высокая и гордая в дни лютого холода. Маленькая мышь была защищена от пронизывающего ветра, и снег падал только мягко под деревом. Но мышонок не мог найти еды в эти холодные темные дни.Пихта Дугласа сжалилась над мышкой и сказала: «Заберись на кончики моих веток, мышка, и ты найдешь мои шишки. Внутри шишек много семян, которые отгонят от вас чувство голода».

Мышонок залез на ветки дерева и нашел так, как сказало дерево. Маленькая мышка хорошо полакомилась семенами пихты Дугласа. Он рос толстым и здоровым на щедрости ели. Другие мышонки посмотрели на него и спросили: «Почему ты такой толстый и здоровый, а все мы худые и холодные»? Маленький мышонок не осмелился сказать другим мышам, где он нашел прекрасные семена. Он боялся, что другие мыши придут и съедят все, что может предложить пихта Дугласа.

Он подождал, пока другие мыши уснут, прежде чем улизнуть, чтобы забраться и поесть. Но не все спали и одна мышка увидела, куда пропала мышонок. Он смотрел, как мышонок ест семена пихты Дугласа, и разбудил всех остальных мышей. Он рассказал им, что видел. Все остальные мыши побежали к елке и забрались на шишки. Они забирались внутрь раскрытых шишек, чтобы добраться до обильного семени.Это вторжение разозлило пихту Дугласа. Пихта захлопнула все свои шишки, заперев внутрь маленьких мышей.

До сих пор, когда вы смотрите на шишку пихты Дугласа, вы можете видеть маленькие задние лапки и хвосты мышей, торчащие из шишек, где они застряли.

Подставка для шоколадных рожков с Микки Маусом

Вы такой же большой поклонник Микки Мауса, как и я? Держу пари, что да, раз уж вы читаете этот пост. Эта поделка-держатель шоколадного конуса Микки Мауса действительно интересна для всех возрастов.

Кроме того, в конце вы можете наполнить его вкусным шоколадом! Это звучит как полная победа в моей книге!

Приготовьтесь еще больше влюбиться в Микки Мауса после этого увлекательного занятия.

Подставка для шоколадных рожков с Микки Маусом

Эту поделку можно использовать в качестве подставки для других забавных угощений после обеда. Хотя вы можете легко положить шоколад в обертке, не упускайте из виду и все другие вкусные варианты.

Провести веселый вечер фильмов Диснея и наполнить эти конусы попкорном — это простой способ создать поделку, которая понравится всем членам семьи.

Вы также можете заполнить его добрыми записками или даже использовать как простой транспорт для новых подписчиков, чтобы передать их соседям или друзьям.

Готовы начать с этой простой поделки Микки Мауса? Соберите материалы, перечисленные ниже, чтобы начать.

Материалы, необходимые для изготовления держателя для конуса Микки Мауса

Материалы, необходимые для изготовления Микки

  • Цветная бумага для диаграмм (белая и черная)
  • Ножницы
  • Чаша среднего размера
  • Карандаш
  • Цветные ручки для эскизов
  • Клей/лента

Материалы, необходимые для изготовления конуса:

  • Светло-желтая крафт-бумага
  • A Лента или клей
  • Красно-коричневая ручка для рисования

Как сделать держатель для конуса Микки Мауса

Возьмите белый лист бумаги и карандаш.Сверху поставьте миску – сняв мерки, начертите круг.

Теперь возьмите ножницы и аккуратно вырежьте нарисованный круг.

Возьмите черную ручку и нарисуйте лицо Микки вот так.

Закрасьте верхнюю часть лица, внутреннюю часть глазных яблок и верхнюю часть рта такой же черной ручкой, как показано на рисунке.

Аккуратно срежьте ножницами ненужную часть с краев вот так.

Теперь закрасьте нос и губы красной ручкой.

Возьмите черную крафт-бумагу. Нарисуйте меньший круг на углу в качестве измерения с помощью карандаша. Теперь сложите эту бумагу на две части, как показано на рисунке.

Аккуратно вырежьте ножницами нарисованный круг, и перед вами получатся 2 круга.

Поместите оба круга с каждой стороны на вершину Микки.

Теперь приклейте их с помощью клея или скотча с обратной стороны.

Вот и готов наш Микки!

Приступаем к изготовлению держателя конуса.

Для этого вам понадобится:

  • Светло-желтая крафт-бумага
  • A Лента или клей
  • Красно-коричневая ручка для рисования

Сложите диаграммную бумагу, как показано на рисунке, и приклейте ее в этом положении с помощью скотча или клея.

Сложите вторую сторону бумаги вот так и приклейте.

Поместите Микки. Мы сделали конус наверху и приклеили его изнутри с помощью скотча или клея.

Теперь возьмите коричневую и красную ручку для рисования. Нарисуйте и закрасьте маленьких Микки на передней стороне конуса обеими ручками для набросков, сохраняя расстояние Lil между каждым из них, как показано на рисунке. (при желании можно нарисовать и на обратной стороне)

Готово! Наша подставка для шоколадных рожков с Микки Маусом готова!

0

Индуцированная светом транслокация в фоторецепторах колбочек

мышиная модель болезни Огучи (стационарная куриная слепота).

Invest Ophthalmol Vis Sci 1999; 40:2978-82.

6. Аллоуэй П.Г., Дольф П.Дж. Роль светозависимого фосфорилирования зрительного аррестина. Proc Natl Acad Sci U S A 1999; 96:6072-

7.

7. Аллоуэй П.Г., Ховард Л., Дольф П.Дж. Образование устойчивых комплексов родоп-

син-аррестин вызывает апоптоз и дегенерацию фоторецепторных клеток

. Нейрон 2000; 28:129-38.

8. Киселев А., Соколич М., Винос Дж., Харди Р.В., Цукер К.С., Ранганатан

Р.Молекулярный путь апоптоза светозависимых фоторецепторов

у дрозофилы. Нейрон 2000; 28:139-52.

9. Орем Н.Р., Дольф П.Дж. Потеря продукта гена фосфолипазы С

вызывает массивный эндоцитоз родопсина и аррестина в фоторецепторах Droso-

phila. Видение Рез 2002; 42:497-505.

10. Лозе М.Дж., Бенович Дж.Л., Кодина Дж., Карон М.Г., Лефковиц Р.Дж. бета-

Аррестин: белок, который регулирует функцию бета-адренорецепторов.Наука 1990; 248:1547-50.

11. Attramadal H, Arriza JL, Aoki C, Dawson TM, Codina J, Kwatra

MM, Snyder SH, Caron MG, Lefkowitz RJ. Бета-аррестин2,

новый член семейства генов аррестина/бета-аррестина. J Biol

Chem 1992; 267:17882-90.

12. Лефковиц Р.Дж. Рецепторы, связанные с G-белком. III. Новые роли киназ рецепторов

и бета-аррестинов в передаче сигналов рецепторов и десенсибилизации

. Дж. Биол. Хим. 1998; 273:18677-80.

13. Hall RA, Premont RT, Lefkowitz RJ. Передача сигналов семиспирального рецептора: за пределами парадигмы G-белка. J Cell Biol 1999;

145:927-32.

14. Гудман О.Б. мл., Крупник Дж.Г., Сантини Ф., Гуревич В.В., Пенн

Р.Б., Ганьон А.В., Кин Дж.Х., Бенович Дж.Л. Бета-аррестин действует как адаптер клатрина

при эндоцитозе бета2-адренорецептора. Природа 1996; 383:447-50.

15. Гудман О.Б. мл., Крупник Дж.Г., Гуревич В.В., Бенович Дж.Л., Кин

Дж.Х.Взаимодействие аррестина/клатрина. Локализация локуса связывания аррестина

на концевом домене клатрина. Дж. Биол. Хим. 1997;

272:15017-22.

16. Миллер В.Е., Модсли С., Ан С., Хан К.Д., Латтрелл Л.М., Лефковиц

Р.Дж. бета-аррестин1 взаимодействует с каталитическим доменом ty-

розинкиназы c-SRC. Роль бета-аррестин-1-зависимой мишени

c-SRC в эндоцитозе рецепторов. J Биол Хим 2000;

275:11312-9.

17.Модсли С., Пирс К.Л., Замах А.М., Миллер В.Е., Ан С., Даака

Ю., Лефковиц Р.Дж., Латтрелл Л.М. Бета(2)-адренергический рецептор

опосредует активацию киназы, регулируемой внеклеточным сигналом, посредством сборки мультирецепторного комплекса

с рецептором фактора эпидермального роста

. J Биол Хим 2000; 275:9572-80.

18. Латтрелл Л.М., Фергюсон С.С., Даака Ю., Миллер В.Е., Модсли С.,

Делла Рокка Г.Дж., Лин Ф., Кавакацу Х., Овада К., Латтрелл Д.К.,

Карон М.Г., Лефковиц Р.Дж.Бета-аррестин-зависимое образование

комплексов бета2-адренергический рецептор-протеинкиназа Src. Наука

1999; 283:655-61.

19. McDonald PH, Chow CW, Miller WE, Laporte SA, Field ME,

Lin FT, Davis RJ, Lefkowitz RJ. Бета-аррестин 2: рецептор-

регулируемый каркас MAPK для активации JNK3. Наука

2000; 290:1574-7.

20. Мураками А., Ядзима Т., Сакума Х., Макларен М.Дж., Инана Г. X-

аррестин: новый аррестин сетчатки, сопоставленный с Х-хромосомой.

Письмо FEBS 1993; 334:203-9.

21. Craft CM, Whitmore DH, Wiechmann AF. Арестин колбочек, идентифицированный путем нацеливания на экспрессию функционального семейства [опубликовано

с опечатками, появляется в J Biol Chem 1994; 269:17756]. J Biol Chem

1994; 269:4613-9.

22. Hisatomi O, Imanishi Y, Satoh T, Tokunaga F. Аррестины, экспрессированные

в фоторецепторных клетках киллифишей. Письмо ФЭБС, 1997; 411:12-8.

23. Абдулаева Г., Харгрейв П.А., Смит В.К.Последовательность аррестинов

фоторецепторов палочек и колбочек лягушек Rana catesbeiana

и Rana pipiens. Локализация транскриптов генов с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией на изолированных фоторецепторах. Евр Дж Биохим 1995; 234:437-42.

24. Craft CM, Whitmore DH. Суперсемейство аррестинов: колбочковые аррестины

являются четвертым семейством. Письмо ФЭБС, 1995; 362:247-55.

25. Маэда Т., Огуро Х., Сохма Х., Куроки Ю., Вада Х., Окисака С.,

Мураками А.Очистка и характеристика бычьего конуса

аррестина (cArr). Письмо ФЭБС 2000; 470:336-40.

26. Смит В.К., Гуревич Е.В., Даггер Д.Р., Вишнивецкий С.А., Шеламер

CL, МакДауэлл Дж.Х., Гуревич В.В. Клонирование и функциональная характеристика

аррестинов палочек и колбочек саламандры. Invest

Ophthalmol Vis Sci 2000; 41:2445-55.

27. Zhu X, Ma B, Babu S, Murage J, Knox BE, Craft CM. Мышь

Характеристика гена аррестина колбочек: промотор нацеливает экспрессию

на фоторецепторы колбочек.Письмо ФЭБС, 2002 г.; 524:116-22.

28. Сакума Х., Мураками А., Фудзимаки Т., Инана Г. Выделение и характеристика

гена X-аррестина человека. Джин 1998; 224:87-

95.

29. Zhu X, Craft CM. Модуляция активности трансактивации CRX

изоформами фосдуцина. Мол Селл Биол 2000; 20:5216-26.

30. Craft CM, Xu J, Slepak VZ, Zhan-Poe X, Zhu X, Brown B, Lolley

RN. PhLP и PhLOP в семействе фосдуцинов G бета

гамма-связывающих белков.Биохимия 1998; 37:15758-72.

31. Окано Т., Фукада Ю., Артамонов И.Д., Йошизава Т. Очистка колбочковых зрительных пигментов

из куриной сетчатки. Биохимия 1989;

28:8848-56.

32. Weiss ER, Raman D, Shirakawa S, Ducceschi MH, Bertram PT,

Wong F, Kraft TW, Osawa S. Клонирование GRK7, кандидата

колбочковая опсинкиназа, из колбочек и палочек доминантных сетчатки млекопитающих

. Мол Вис 1998; 4:27 .

33. Осава С., Раман Д., Вайс Э.Р.Гетерологическая экспрессия и ре-

конституция родопсина с помощью родопсинкиназы и аррестина.

Методы Enzymol 2000; 315:411-22.

34. Ли Р.Х., Браун Б.М., Лолли Р.Н. Протеинкиназы наружных сегментов палочки

сетчатки: идентификация и частичная характеристика

циклических нуклеотид-зависимых протеинкиназ и родопсинкиназы

. Биохимия 1981; 20:7532-8.

35. McDowell JH, Robinson PR, Miller RL, Brannock MT, Arendt

A, Smith WC, Hargrave PA.Активация аррестина: необходимость

фосфорилирования в виде отрицательного заряда остатков в синтетических

пептидах из карбоксиконцевой области родопсина.

Invest Ophthalmol Vis Sci 2001; 42:1439-43.

36. Craft CM, Whitmore DH, Donoso LA. Дифференциальная экспрессия

мРНК и белка, кодирующего S-антиген сетчатки и пинеальной железы, во время цикла свет/темнота. Дж. Нейрохим, 1990; 55:1461-73.

37. McGinnis JF, Whelan JP, Donoso LA.Временные, циклические изменения

в продуктах генов зрительных клеток мыши во время цикла свет-темнота. J

Neurosci Res 1992; 31:584-90.

38. McGinnis JF, Austin BJ, Stepanik PL, Lerious V. Светозависимая

регуляция транскрипционной активности гена аррестина

млекопитающих. J Neurosci Res 1994; 38:479-82.

39. Bowes C, Lee T, Danciger M, Baxter LC, Applebury ML, Farber

DB. Дегенерация сетчатки у мышей rd вызывается дефектом

в бета-субъединице цГМФ-фосфодиэстеразы палочек.Природа

1990; 347:677-80.

40. Питтлер С.Дж., Бэр В. Идентификация нонсенс-мутации в гене

бета-субъединицы

фосфодиэстеразы палочки фоторецептора

цГМФ мыши rd. Proc Natl Acad Sci U S A 1991; 88:8322-6.

41. Картер-Доусон Л.Д., ЛаВейл М.М., Сидман Р.Л. Дифференциальный эффект

мутации rd на палочки и колбочки в сетчатке мыши. Invest

Ophthalmol Vis Sci 1978; 17:489-98.

© 2002 Molecular VisionMolecular Vision 2002; 8:462-71

470

Границы | Субъединица конусной фосфодиэстеразы-6γ’ увеличивает сборку холофермента колбочки PDE6 и стабильность в модели мыши, лишенной как палочек, так и колбочек каталитических субъединиц PDE6

Введение

Циклические нуклеотидные фосфодиэстеразы 6 (ФДЭ6) принадлежат к высококонсервативным ФДЭ млекопитающих, состоящим из 11 различных семейств, которые модулируют клеточные уровни вторичных мессенджеров, цАМФ и цГМФ, контролируя скорость их деградации (Beavo, 1995; Francis et al., 2001). ФДЭ6 является ключевым регулятором цитоплазматической концентрации цГМФ в фоторецепторных клетках палочек и колбочек. Из-за своей основной роли в контроле цГМФ регуляция ФДЭ6 необходима для скорости, чувствительности, восстановления и адаптации зрительных сигналов (Burns and Arshavsky, 2005; Fu and Yau, 2007). Палочка PDE6 состоит из двух каталитических субъединиц α и β, кодируемых генами PDE6A , PDE6B , и двух ингибирующих субъединиц γ, кодируемых PDE6G . Напротив, колбочка PDE6 состоит из двух идентичных каталитических субъединиц α’, кодируемых PDE6C , и двух специфичных для колбочек ингибирующих субъединиц γ’, кодируемых PDE6H (Gillespie and Beavo, 1988; Hamilton and Hurley, 1990; Li et al. ., 1990).

Несмотря на важную роль, которую он играет в функции фоторецептора, взаимосвязь между структурой и функцией ФДЭ6 изучена недостаточно из-за нарушения его функциональной экспрессии в различных системах in vitro (Qin et al., 1992; Piriev et al., 1993). , 2003; Цинь и Бэр, 1994). Электронно-микроскопический анализ очищенных стержневых каталитических димеров ФДЭ6 показал, что каталитические домены расположены на С-конце и являются высококонсервативными среди всех известных членов семейства ФДЭ (Beavo, 1995).N-концевые домены каталитических субъединиц PDE6 состоят из двух регуляторных цГМФ-связывающих мотивов GAF (GAF A и GAF B), названных по их присутствию в c G MP-регулируемых PDE, a денилилциклазах и E. coli . белок F h2A (Aravind and Ponting, 1997). Известно, что существует синергетический эффект между связыванием ФДЭ6γ и цГМФ с каталитическими субъединицами, поскольку: (1) связывание ФДЭ6γ с каталитическими субъединицами усиливает сродство цГМФ к некаталитическим участкам; и (2) когда цГМФ связывается с доменами GAF, увеличивается сродство ФДЭ6γ к каталитическим субъединицам (Cote et al., 1994; Ямадзаки и др., 2002). Область ФДЭ6γ, ответственная за этот эффект, картирована с центральным поликатионным доменом ФДЭ6γ, который, как известно, обладает высоким сродством к каталитическому димеру (Артемьев и Хамм, 1992; Моу и Кот, 2001). Функциональное картирование PDE6γ с каталитическими субъединицами показало, что С-конец PDE6γ является ключевым ингибирующим доменом. Он взаимодействует непосредственно с активным центром ФДЭ6 и блокирует доступ субстрата к каталитическому карману и, таким образом, контролирует гидролиз цГМФ (Granovsky et al., 1997; Баррен и др., 2009 г.; Чжан и Артемьев, 2010). Средняя область PDE6γ стабилизирует общую аффинность связывания PDE6γ с каталитическими субъединицами (Zhang et al., 2012).

Одной из уникальных особенностей палочковидной ФДЭ6 среди семейства ФДЭ является то, что ее каталитические субъединицы состоят из субъединиц гетеродимера αβ. Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что PDE6γ может формировать структурно и функционально различные взаимодействия с α- и β-субъединицами, и это асимметричное связывание PDE6γ с PDE6αβ может представлять собой важный регуляторный механизм фототрансдукции палочек (Guo et al., 2005, 2006). Молекулярный механизм, лежащий в основе отличительных фотоответов палочек и колбочек, плохо изучен и является одним из фундаментальных вопросов, остающихся в биологии фоторецепторов. Потенциальная роль PDE6 палочек и колбочек в фототрансдукции представляет особый интерес, потому что функции PDE6 в палочках и колбочках в качестве эффекторных ферментов в контроле уровней цГМФ во внешних сегментах являются ключом к полному пониманию фотоответов палочек и колбочек. Ранее мы показали, что палочки мышей rd10 , экспрессирующих колбочки PDE6α’, доставляемые вектором аденоассоциированного вируса (AAV), более чувствительны к свету, чем палочки дикого типа, скорее всего, из-за более медленного выключения их реакции на свет (Deng et al. др., 2013). Аналогичное исследование с использованием трансгенного подхода показало, что замена PDE6α’ колбочек на PDEαβ палочек частично имитирует особенности адаптации к свету (Majumder et al., 2015). Здесь мы изучаем сродство ассоциации между различными субъединицами PDE6 после AAV-опосредованной доставки у мышей rd10/cpfl1 . Мыши rd10/cpfl1 несут мутации как в палочке PDE6β, так и в колбочке PDE6α’, и у них также отсутствует палочка PDE6αγ и колбочка PDE6γ’. Мы обнаружили, что колбочка PDE6α’ имеет более высокое сродство к своему партнеру PDE6γ’, чем к PDE6γ, а присутствие PDE6γ’ увеличивает сборку холофермента колбочки PDE6 и повышает его стабильность.

Материалы и методы

Животные

Мыши

Rd10, cpfl1 и C57BL/6J дикого типа были получены из лаборатории Джексона (Бар-Харбор, Мэн, США). Мышей Rd10 и cpfl1 скрещивали для получения гомозиготных мышей с мутацией rd10/cpfl1 . Генотипирование rd10 и cpfl1 проводили в соответствии с ранее опубликованными методами (Chang et al., 2007; Kolandaivelu et al., 2011). Мышей содержали в Центре медицинских наук Университета Флориды в помещениях службы ухода за животными в постоянно темной комнате, за исключением содержания при освещенности ~400 люкс.Физиологические эксперименты проводили при слабом красном освещении с использованием фильтра Kodak № 1 Safelight (пропускание > 560 нм). Все эксперименты были одобрены местными комитетами по уходу за животными и их использованию в Университете Флориды и Университете Западной Вирджинии и проводились в соответствии с Заявлением ARVO об использовании животных в офтальмологических исследованиях и исследованиях зрения и правилами NIH.

Конструкция и упаковка AAV Vectors

кДНК PDE6γ’ мыши была синтезирована с помощью GenScript (Piscataway, NJ, USA) и субклонирована под вездесущим конститутивным промотором β-актина курицы (smCBA; Haire et al., 2006) в самокомплементарных векторах AAV для создания sc-smCBA-mPDE6γ’. Конструирование smCBA-mPDE6β и smCBA-mPDE6α’ было описано ранее (Deng et al., 2013). Все конструкции были упакованы в AAV серотипа 8-Y733F путем трансфекции клеток h393 по ранее опубликованным методикам (Золотухин и др., 1999).

Субретинальные инъекции

Все векторы были доведены до одинакового титра 5 × 10 12 векторных геномов/мл перед инъекцией. Один микролитр вектора вводили субретинально в левые глаза детенышей rd10/cpfl1 в постнатальном возрасте 14 (P14), в то время как правые глаза служили необработанными контролями.Для совместной инъекции векторы smCBA-mPDE6α’ и sc-smCBA-mPDE6γ’ смешивали в соотношении 2:1 и вводили по 1 мкл. Субретинальные инъекции выполняли, как описано ранее (Pang et al., 2006, 2008). Вкратце, глаза расширили 1% атропином (Akorn, Inc. Lake Forest, IL, USA) и 2,5% раствором гидрохлорида фенилэфрина (Paragon Biotek, Portland, OR, USA). Отверстие в области зрачка было сделано через роговицу с помощью одноразовой иглы 30 калибра. Тупоконечная игла 33 размера, установленная на шприце Hamilton объемом 5 мкл (Hamilton Co., Рино, Невада, США) затем вводили через отверстие роговицы, минуя линзу и достигая субретинального пространства. Инъекции визуализировали по флуоресцеин-положительным субретинальным пузырькам. После инъекции вводили 1% глазные капли атропина и глазную мазь неомицин/полимиксин B/дексаметазон (Bausch and Lomb Inc. Tampa, FL, USA).

Анализ ЭРГ

Через 5 недель после инъекции, адаптированные к темноте и адаптированные к свету электроретинограммы (ERG) были зарегистрированы отдельно с использованием визуальной диагностической системы UTAS, оснащенной Big Shot Ganzfeld (LKC Technologies, Gaithersburg, MD, USA) в соответствии с ранее описанными протоколами (Deng и другие., 2013). Скотопические записи стержня были выполнены с тремя увеличивающимися уровнями освещенности: -1,6, -0,6 и 0,4 log cds/м 2 после ночной адаптации к темноте. Регистрировали и усредняли десять ответов при каждой интенсивности света. Фотографические конусные записи были сделаны после того, как мыши были адаптированы к белому фоновому свету 30 кд/м 2 в течение 10 мин. Записи проводились с четырьмя интенсивностями вспышки 0,1, 0,7, 1,0 и 1,4 логарифмических кд/м 2 в присутствии 30 кд/м 2 фонового света.Было записано и усреднено 50 ответов для каждой интенсивности. Амплитуды скотопических и фотопических b-волн от необработанных, обработанных rd10/cpfl1 и контролей дикого типа при каждой интенсивности усредняли и использовали для получения стандартного отклонения.

Иммуногистохимия и морфология

Через три дня после записи ЭРГ мышей умерщвляли и энуклеировали глаза для иммуногистохимического анализа. Глаза фиксировали в 4% параформальдегиде при комнатной температуре в течение 3 часов. Роговицу, хрусталик и стекловидное тело удаляли из глаз, не затрагивая сетчатку.Оставшийся наглазник промывали PBS, а затем подвергали криозащите путем погружения в 30% раствор сахарозы в PBS на 4 часа. Затем наглазники погружали в криостатный компаунд (Tissue TEK OCT, Sakura Finetek USA, Inc., Торранс, Калифорния, США) и замораживали при температуре -80°C. Встроенные наглазники делали срезы толщиной 12 мкм, промывали в PBS и блокировали в 3% BSA, 0,3% Triton X-100 в PBS на 1 ч при комнатной температуре. Первичными антителами были: PDE6α’ (3184P, поликлональное антитело, выращенное у кролика с использованием очищенного белка PDE6α’ мыши с His-меткой (аминокислоты 1–115) в качестве иммуногена, подарок Dr.Visvanathan Ramamurthy, Университет Западной Вирджинии, Моргантаун, Западная Вирджиния, США, 3184P обозначает номер кролика, использованный для получения колбочкового антитела PDE6a’; Киршман и др., 2010; Kolandaivelu et al., 2011), родопсин, опсин синих колбочек и опсин красных/зеленых колбочек (Millipore Bioscience Research Reagents). Все первичные антитела разводили 1:1000 в 1% БСА в PBS и инкубировали срезы в течение ночи при 4°С. Затем срезы трижды промывали PBS, инкубировали с вторичными антителами IgG, мечеными Alexa-594 (Invitrogen) в разведении 1:500, и лектином агглютинина арахиса (PNA), конъюгированным с Alexa Fluor 488 (Invitrogen) в разведении 1:200 в PBS при комнатной температуре в течение 1 ч и промывали PBS.Срезы монтировали с помощью Vectashield Mounting Medium for Fluorescence (H-1000, Vector lab, In. Burlingame, CA, USA) и закрывали покровным стеклом. Срезы анализировали с помощью микроскопа Zeiss CD25, оснащенного Axiovision Rel. ПО 4.6.

Для морфологического анализа наглазники готовили, как описано выше, затем заливали парафином и делали срезы зрительного нерва на расстоянии 4 мкм с последующим окрашиванием H&E.

Иммунопреципитация (ИП)

комплекса PDE6 и плотность общего белка анализировали с помощью иммунопреципитации (IP) с моноклональным антителом ROS-1 и иммуноблоттинга.Замороженные наглазники (по 3 в каждом) гомогенизировали в 400 мкл IP-буфера, содержащего ингибиторы протеаз и фосфатаз и 10 мМ йодацетамида (10 мМ Tris-HCl, pH 7,5, 100 мМ KCl, 20 мМ NaCl, 1 мМ MgCl 2 ), используя пестиком в пробирке Эппендорфа на 1,5 мл на льду (5 с × 4). Для солюбилизации белков добавляли Тритон Х-100 до конечной концентрации 1% и инкубировали образцы при 4°С в течение 30 мин. Супернатанты собирали центрифугированием при 10000× g в течение 5 минут при 4°C и инкубировали с 1.5 мкг моноклональных антител ROS-1, связанных с белками A/G, в течение 3 часов. Несвязавшиеся белки удаляли, а гранулы промывали промывочным буфером (1X PBS, содержащий 0,1% Triton X-100). Субъединицы ФДЭ6, связанные с АФК-1, элюировали из гранул путем добавления 1X буфера для образцов SDS/PAGE (62,5 мМ Трис, pH 6,8, 2% SDS, 10% глицерина, 0,005% бромфенолового синего, 5% 2-меркаптоэтанола) и кипячения в течение 5 минут. Элюированные белки разделяли в 4–20% SDS-полиакриламидном геле (Bio-Rad) и проводили иммуноблоттинг, как описано ранее, с каталитическими и ингибирующими субъединицами, специфичными к палочкам или колбочкам антител PDE6 (Kolandaivelu et al., 2011; Денг и др., 2013). Антитело RetGC1 было получено от доктора Дэвида Гарберса (умершего, Университет Юго-Западной медицинской школы, Даллас, Техас, США). Сканирование мембран и плотность белков измеряли с помощью системы инфракрасной визуализации Odyssey (LI-COR Biosciences). Изображения являются репрезентативными как минимум для трех независимых экспериментов.

Статистический анализ

Амплитуды скотопических a- и b-волн

и фотопических b-волн при указанной интенсивности вспышки сравнивали с помощью однофакторного ANOVA с апостериорным тестом Бонферрони для сравнения средних значений при отдельных интенсивностях вспышки.Количественное определение белка анализировали с помощью однофакторного ANOVA с тестом Bonferroni post hoc для сравнения средних значений каждой обработки. Данные выражали как среднее значение ± стандартная ошибка среднего.

Результаты

Гистологический анализ

rd10/cpf1 сетчатки мыши

Сначала мы сравнили дегенерацию фоторецепторных клеток палочек у мышей rd10/cpfl1 с мышами rd10 , выращенными в темноте. Гистологическое исследование срезов сетчатки, окрашенных гематоксилином и эозином (H&E), выявило прогрессирующее истончение внешнего ядерного слоя (ONL) в сетчатке rd10/cpfl1 , отражающее дегенерацию сетчатки, наблюдаемую у мышей rd10 (рис. 1A).У выращенных в темноте мышей rd10/cpfl1 ONL был таким же, как и у мышей дикого типа в возрасте 2 недель, однако наружные и внутренние сегменты оказались короче. Дегенерация сетчатки была быстрой, и через 4 недели осталась только половина ONL. К 8 неделям присутствовало только 2–3 слоя ONL. Мы установили, что скорость потери фоторецепторных клеток палочек у мышей rd10/cpfl1 очень сходна с таковой у мышей rd10 , как сообщалось ранее (Chang et al., 2007).

Рисунок 1 .Гистологический анализ сетчатки rd10/cpf1 мышей. (A) Сравнение морфологии rd10/cpfl1 и rd10 с помощью окрашивания H&E. Палочковые фоторецепторные клетки дегенерируют с возрастом, о чем свидетельствует истончение ONL и потеря наружных и внутренних сегментов фоторецепторов. (B) Сравнение дегенерации фоторецепторных клеток колбочек в rd10/cpfl1 с cpfl1 с помощью окрашивания антителами против опсина колбочек (обозначены красным). ОС/ИС, внешний/внутренний сегменты; ONL, внешний ядерный слой; INL, внутренний ядерный слой; GCL, ганглиозный слой клеток.Масштабная линейка: 20 мкм.

Затем мы охарактеризовали скорость дегенерации фоторецепторных клеток колбочек путем сравнения картины иммуногистохимии опсина колбочек у 2-, 4- и 8-недельных мышей rd10/cpfl1 и cpfl1 с использованием смеси антител к красному/зеленому и синему опсину. . Одно предыдущее исследование показало, что, хотя сетчатка cpfl1 демонстрирует в целом нормальную морфологию и слоистость, имеется вакуолизация небольшого подмножества клеток в слое фоторецепторов, что указывает на потерю колбочек уже через 3 недели, с продолжающейся дегенерацией колбочек и полной потерей колбочек к 10 неделям. возраста (Chang et al., 2009). Мыши Rd10/cpfl1 демонстрируют характер окрашивания опсином колбочек, сходный с таковым у мышей cpfl1 в возрасте 2 недель, с последующей быстрой дегенерацией фоторецепторных клеток колбочек с отсутствием большинства колбочек к 4-недельному возрасту. К 8 неделям окрашивание колбочкового опсина не обнаруживалось (рис. 1В). Колбочки у мышей rd10/cpfl1 дегенерировали немного быстрее, чем у мышей cpfl1 , скорее всего, из-за сопутствующей дегенерации палочек. Кроме того, мыши rd10/cpfl1 демонстрировали как плоские скотопические, так и фотопические реакции ЭРГ в возрасте 3 недель (данные не представлены).

Функция палочек и колбочек в обработанных ФДЭ6α’ и ФДЭ6α’+ФДЭ6γ’

rd10/cpfl1 Сетчатка

Сначала мы охарактеризовали экспрессию колбочек PDE6α’ у мышей rd10/cpfl1 , получавших AAV8 Y733F-smCBA-PDE6α’. Вектор вводили субретинально в один глаз постнатальных мышей 14 (P14) rd10/cpfl1 , при этом контралатеральные глаза оставались необработанными и служили контролем. Экспрессию PDE6α анализировали с помощью иммуноокрашивания через 5 недель после инъекции. В глазах дикого типа C57BL/6 PDE6α экспрессируется специфически в колбочках (рис. 2).В необработанных глазах rd10/cpfl1 экспрессия PDE6α’ отсутствовала, тогда как в инъецированных глазах наблюдалась устойчивая экспрессия PDE6α’ как в палочках, так и в колбочках.

Рисунок 2 . Обнаружение экспрессии фосфодиэстеразы 6 (PDE6)α’ методом иммунофлуоресценции в сетчатке rd10/cpfl1 после доставки аденоассоциированного вируса (AAV)-smCBA-PDE6α’. Экспрессия PDE6α’ не обнаружена в необработанных глазах (левая панель), в то время как PDE6α’ (обозначена красным) экспрессируется как в палочках, так и в колбочках в обработанных глазах (средняя панель).PDE6α экспрессируется исключительно в колбочках у мышей дикого типа (правая панель). Шишки были помечены агглютинином арахиса (PNA) как зеленые. Обратите внимание на гораздо более толстую ONL в обработанной сетчатке по сравнению с необработанной контрольной. Масштабная линейка, 20 мкм.

Затем мы охарактеризовали функцию палочки в глазах rd10/cpfl1 , обработанных PDE6α’- и PDE6α’+PDE6γ’, с помощью полнопольного анализа ЭРГ. Экспрессия PDE6α’ или PDE6α’+PDE6γ’, управляемая промотором smCBA, приводила к значительному восстановлению скотопических ответов ЭРГ через 5 недель после инъекции (рис. 3A–C).Как средние амплитуды зубцов b, так и зубцов а в обработанных глазах значительно выше, чем их неопределяемые ответы ЭРГ в контралатеральных необработанных глазах при трех протестированных интенсивностях света. Средняя амплитуда опосредованной палочками b-волны при интенсивности вспышки -1,6 log cds·м -2 составила 166 ± 14 мкВ (среднее значение ± стандартная ошибка среднего) в глазах, получавших ФДЭ6α’, что значительно выше, чем в контрольной группе, не получавшей лечения ( n = 6, P < 0,001, F = 253,0), и примерно 50% контрольных животных дикого типа.Средняя амплитуда а-волны, опосредованной палочками, при интенсивности вспышки -1,6 log cds м -2 составила 21 ± 4,9 мкВ в глазах, получавших ФДЭ6α’, что значительно выше, чем в контрольной группе без лечения ( n = 6, P < 0,01, F = 28,34). Измеренные реакции ЭРГ палочки были сходными в глазах, получавших только ФДЭ6α’ или смесь ФДЭ6α’ и ФДЭ6γ’ ( n = 6, P > 0,05).

Рисунок 3 . Скотопическая и фотопическая электроретинограмма (ЭРГ) у мышей rd10/cpfl1 , получавших только ФДЭ6α’ или ФДЭ6α’ и ФДЭ6γ’ вместе. (A) Репрезентативные примеры адаптированных к темноте кривых ЭРГ от мышей rd10/cpfl1 через 5 недель после введения AAV-smCBA-PDE6α’. (B) Адаптированный к темноте зубец b частично восстанавливается в глазах после инъекции rd10/cpfl1 . Односторонний ANOVA с апостериорным тестом Бонферрони продемонстрировал значительную разницу между глазами без инъекций и глазами, обработанными контралатеральным вектором, при интенсивности света -1,6, -0,6 и 0,4 log кд/м 2 (приведенные данные являются средним значением ± SEM, N = 6, * p < 0.001 при всех трех интенсивностях света, F = 253,0, 134,6 и 212,9 при -1,6, -0,6 и 0,4 log кдс/м 2 соответственно). (C) Адаптированная к темноте а-волна частично восстанавливается в глазах после инъекции rd10/cpfl1 . Односторонний ANOVA с апостериорным тестом Бонферрони продемонстрировал значительную разницу между глазами без инъекций и глазами, обработанными контралатеральным вектором (среднее значение ± стандартная ошибка среднего, N = 6, * p < 0,01 при всех трех интенсивностях света, F = 28.34, 20,98 и 63,20 при -1,6, -0,6 и 0,4 log cds/м 2 соответственно). (D) Репрезентативные примеры полностью адаптированных к свету кривых ЭРГ от мышей rd10/cpfl1 через 5 недель после введения только AAV-smCBA-PDE6α’ или совместной инъекции AAV-smCBA-PDE6α’ и scAAV- смCBA-PDE6γ’. (E) Амплитуды фотопических b-волн значительно выше в глазах, которым одновременно вводили ФДЭ6α’+γ’, чем в глазах, получавших только ФДЭ6α’. Гистограмма показывает усредненные ответы ЭРГ от 6 мышей при интенсивности света 1.4 log cds/m 2 (приведенные данные являются средними ± SEM, N = 6, * p < 0,01, F = 580,4).

Спасение палочек-фоторецепторов в глазах, обработанных PDE6α’, также было подтверждено исследованием морфологии сетчатки и иммуноокрашиванием на родопсин. Окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) показало частичное сохранение структуры сетчатки в обработанных глазах с сохранением 7–8 слоев ядер фоторецепторов в ONL, в то время как в контралатеральных необработанных глазах оставался только один слой.Наружные сегменты сетчатки также были сохранены в обработанных глазах (дополнительный рисунок S1A). В соответствии с этим результатом иммуноокрашивание антителами к родопсину показало гораздо более сильную экспрессию родопсина в обработанных глазах по сравнению с почти неопределяемым окрашиванием в необработанных глазах (дополнительная фигура S1B).

В отличие от надежного спасения палочек у мышей rd10/cpfl1 с помощью PDEα’, восстановление функции колбочек было значительно снижено в глазах, обработанных PDE6α’ (рис. 3D, E). Чтобы проверить гипотезу о том, что присутствие PDE6γ’ может способствовать правильному сворачиванию колбочкового холофермента PDE6 и улучшить спасение колбочек ERG, PDE6γ’, управляемый промотором smCBA, упакованным в быстродействующий самокомплементарный вектор AAV, был совместно инъецирован с PDE6α’.Улучшенные фотопические ЭРГ-ответы были получены при средней амплитуде конусообразной b-волны 38 ± 1,5 мкВ ( n = 6) при 1,4 log cds m -2 , что было значительно выше, чем амплитуды в глазах, получавших только ФДЭ6α’ ( 12 ± 1,9 мкВ, P < 0,001, F = 580,4). Иммуноокрашивание антителами к M/S-опсину и ПНК в глазах с коинъекциями показало спасение морфологии колбочек (дополнительная фигура S1C). Мягкое восстановление морфологии колбочек также наблюдалось в глазах, обработанных PDE6α’ (данные не показаны), однако эти колбочки в основном существовали из-за более медленной дегенерации из-за восстановления палочек.Наши результаты показывают, что присутствие PDE6γ’ из вектора экспрессии с более ранним началом может способствовать более эффективному правильному фолдингу, сборке и стабилизации PDE6α’. Стабильность комплекса PDE6 α’γ’ может иметь жизненно важное значение для повышения выживаемости и функционирования колбочек.

Наличие PDE6γ’ увеличивает сборку конуса PDE6 и стабильность

Мыши Rd10/cpfl1 несут мутации как в палочке PDE6β, так и в колбочке PDE6α’. Затем мы исследовали уровни субъединиц PDE6α’, PDE6γ’ и PDE6γ с помощью вестерн-блоттинга экстрактов сетчатки C57Bl/6 дикого типа, неинъецированных rd10/cpfl1 и rd10/cpfl1 , инъецированных PDE6β, PDE6α’, или PDE6α’+PDE6γ’.Мы воспользовались тем фактом, что PDE6γ’, специфичная для колбочек, имеет немного более высокую молекулярную массу, чем PDE6γ для палочек (Gillespie and Beavo, 1988), и использовали одно и то же антитело, чтобы различить их. Вестерн-блот-анализ показал, что в необработанных глазах rd10/cpfl1 отсутствовали все три субъединицы стержня PDE6 (рис. 4A; дополнительная фигура S2), а лечение PDE6α восстанавливало экспрессию субъединиц стержня PDE6γ, аналогично глазам, обработанным стержнем PDE6β (рис. 4A). Однако экспрессия колбочек PDE6γ’ не была обнаружена в глазах, обработанных PDE6α’.Напротив, rd10/cpfl1 глаз, которым совместно вводили PDE6α’+PDE6γ’, показали значительно более высокие уровни экспрессии как PDE6α’, так и PDE6γ’ (рис. 4А). Качественный анализ количества ФДЭ6α’, ФДЭ6γ и ФДЭ6γ’ в этих образцах показал, что уровни ФДЭ6α’ были приблизительно вдвое выше в глазах, получавших совместную инъекцию, по сравнению с глазами, получавшими только ФДЭ6α’ (рис. 4В, верхняя панель, N = 3, ). Р <0,005). Уровни ФДЭ6γ в глазах, получавших ФДЭβ и ФДЭ6α’, были сходными ( N = 3, P > 0.05) и были примерно вдвое меньше, чем в контроле дикого типа ( N = 3, P <0,001). Однако уровни PDE6γ были снижены ( N = 3, P <0,05), в то время как количество PDE6γ’ было примерно в два раза больше, чем PDE6γ, в глазах с коинъекциями (рис. 4B, нижняя панель). PDE6γ’ доставляется в половине векторных геномов PDE6α’ (соотношение векторных геномов 1:2). Ожидается, что экспрессия PDE6γ’ будет происходить как в палочках, так и в колбочках после доставки вектора AAV, поскольку мы используем неспецифический вездесущий промотор smCBA.Однако у нас нет специфического антитела к PDE6γ’, чтобы продемонстрировать это с помощью иммуногистохимии. Более высокие уровни ФДЭ6α’ в глазах с коинъекциями, скорее всего, связаны с наличием ФДЭ6γ’.

Рисунок 4 . Сборка конуса PDE6 и стабильность улучшаются, когда PDE6α’ и PDE6γ’ экспрессируются совместно. (A) Иммуноблоттинг экстрактов сетчатки из контроля дикого типа, неинъецированных мышей rd10/cpfl1 , rd10/cpfl1 , инъецированных PDE6β, PDE6α’ и PDE6α’+PDE6γ’, и проанализированных с указанными антителами. (B) Количественное определение уровней колбочек PDE6α’, палочек PDE6γ и колбочек PDE6γ’ в экстрактах сетчатки из образцов в (A) . Плотность полос измеряли с помощью анализатора изображений Li-COR Odyssey. Статистический анализ показывает, что уровень ФДЭ6α’ значительно выше в глазах, обработанных ФДЭ6α’+ФДЭ6γ’, чем в глазах, получавших только ФДЭ6α’ (верхняя панель, среднее значение ± стандартная ошибка среднего, N = 3, * p <0,005), тогда как уровень ФДЭ6γ снижено в глазах, обработанных ФДЭ6α'+ФДЭ6γ', по сравнению с глазами, обработанными только ФДЭ6α' (нижняя панель, среднее значение ± стандартная ошибка среднего, N = 3, * p <0.05, F = 53,44). Нет существенной разницы в уровнях ФДЭ6γ между глазами, получавшими ФДЭ6β и ФДЭ6α’ ( N = 3, p > 0,05). (C) Иммуноблоты показывают собранную палочку PDE6 и колбочку PDE6 при зондировании мышиными моноклональными антителами ROS из экстрактов сетчатки контрольных животных дикого типа, неинъецированных мышей rd10/cpfl1 и rd10/cpfl1 , которым инъецировали PDE6β, PDE6α’, и PDE6α’+PDE6γ’. Иммуноблоты зондировали указанными антителами.Образцы иммунопреципитации (ИП) в 10 раз более концентрированы, чем входные фракции. Слева показаны маркеры молекулярной массы белков. Т, всего; U, несвязанный и E, элюирование.

Наконец, мы исследовали статус сборки PDE6 из вышеуказанных образцов с помощью IP с использованием ROS-I, мышиного моноклонального антитела, которое распознает исключительно собранные и функциональные комплексы PDE6 как в палочках, так и в колбочках (Kolandaivelu et al., 2009, 2011). Ранее мы показали, что восстановление светочувствительности с помощью колбочек PDE6α’ у палочек мышей rd10 связано с образованием функционального комплекса между колбочками PDE6α’ и палочками PDE6γ (Deng et al., 2013). Здесь мы подтверждаем, что восстановление функции стержня с помощью PDE6α’ у мышей rd10/cpfl1 также связано со стабилизацией эндогенной PDE6γ и образованием в результате функционального комплекса PDE6α’γ (рис. 4C, дополнительная фигура S2). Интересно, что в глазах с коинъекциями ФДЭ6α’+ФДЭ6γ’ большая часть ФДЭ6α’ связана с ФДЭ6γ’, и лишь небольшое количество ФДЭ6α’ связано со палочковидной ФДЭ6γ (рис. 4С), хотя ФДЭ6γ восстанавливается благодаря присутствию ФДЭ6α’ . Эти результаты позволяют предположить, что сниженный уровень ФДЭ6γ в глазах, которым вводили одновременно, может быть результатом деградации из-за ее сниженного связывания с ФДЭ6α’.В целом, эти результаты ясно демонстрируют, что колбочка PDE6γ’, поставляемая с PDE6α’, специфически усиливает сборку колбочек PDE6 и ее стабильность, в то время как сборка эндогенной палочки PDE6γ с PDE6α’ сильно снижается в присутствии PDE6γ’.

Обсуждение

Мы изучили ассоциацию между субъединицами PDE6 in vivo , используя мышей rd10/cpfl1 . Мыши rd10/cpfl1 не имеют обнаруживаемой функции ERG палочек и колбочек и несут мутации как в палочке PDE6β, так и в колбочке PDE6α’.Интересно, что у этих мышей также отсутствует PDE6αγ палочек и PDE6γ’ колбочек. Потеря PDE6 как палочек, так и колбочек у этих мышей приводит к раннему началу и быстрой дегенерации фоторецепторных клеток палочек и колбочек. Здесь мы показываем, что опосредованная вектором AAV экспрессия колбочки PDE6α’, управляемая конститутивным промотором, может восстанавливать опосредованные палочками световые ответы, и это функциональное спасение достигается за счет стабилизации эндогенной палочки PDE6γ и образования комплекса PDE6α’γ. Однако улучшенные фотопические ЭРГ-ответы были достигнуты только в глазах, которым одновременно вводили векторы, экспрессирующие как PDE6α’, так и PDE6γ’, но не в глазах, которым вводили только вектор PDE6α’.Уровни ФДЭ6α’ значительно выше в глазах, которым вводили одновременно, и большая часть ФДЭ6α’ образует комплекс с ФДЭ6γ’, хотя ФДЭ6γ также обнаруживается. Эти результаты демонстрируют, что PDE6α’ имеет более высокое внутреннее сродство к PDE6γ’, и его присутствие облегчает сборку колбочкового холофермента и повышает его стабильность.

Одной из самых больших проблем, препятствующих исследованию ФДЭ6, является недостаточность функциональной экспрессии этого фермента в различных системах in vitro . Недавно было показано, что AIPL1 является обязательным шапероном, необходимым для гетерологичной экспрессии активной PDE6α’ в культивируемых клетках, и что присутствие PDE6γ резко увеличивает долю правильно уложенной функциональной PDE6, продуцируемой в присутствии AIPL1 (Gopalakrishna et al., 2016). Наши результаты, показывающие, что присутствие PDE6γ’ помогает стабилизировать колбочковый холофермент PDE6, согласуются с этим наблюдением. В нашем эксперименте мы также обнаружили, что PDE6γ’ повышает стабильность PDE6α’ и облегчает сборку колбочек PDE6, о чем свидетельствует значительное повышенное количество PDE6α’, а также сборка и функционирование колбочек PDE6. Мы также обнаружили, что уровни ФДЭ6γ снижаются в глазах, получавших совместную инъекцию, по сравнению с глазами, получавшими только ФДЭ6α’. Мы предполагаем, что это снижение является результатом деградации из-за уменьшения связи с PDE6α’, когда присутствует PDE6γ’.Это подтверждается предыдущими исследованиями, предполагающими, что стабильность комплекса PDE6 зависит от ассоциации его взаимодействующих партнеров. Во-первых, у rd10 мышей из , несущих мутацию PDE6β, PDE6α и PDE6γ, не было обнаружено (Deng et al., 2013). Во-вторых, AIPL1 взаимодействует с PDE6α, и это взаимодействие необходимо для сборки PDE6. В отсутствие AIPL1 все субъединицы PDE6 деградируют независимо от их нормального синтеза (Kolandaivelu et al., 2009). Таким образом, наши данные подтверждают тот же вывод, что PDE6γ’ потенцирует правильное сворачивание PDE6α’ и играет критическую роль в созревании колбочкового холофермента PDE6.

Интересный вопрос, поднятый в этом исследовании, заключается в том, почему PDE6γ’ улучшает сборку и стабильность колбочек PDE6 по сравнению с палочками PDE6γ? Предыдущее исследование показало, что палочка PDE6γ естественным образом существует в колбочках мышей и может соединяться с PDE6α’ колбочек для защиты функции и стабильности колбочек (Brennenstuhl et al., 2015). Наши данные показывают, что PDE6α’ может сочетаться с PDE6γ, когда PDE6γ’ отсутствует. Однако, когда PDE6γ’ присутствует вместе с эндогенной PDE6γ, PDE6α’ имеет более высокую ассоциативную аффинность со своим естественным партнером.Такое более высокое сродство может играть роль в более быстрой кинетике световой реакции клеток фоторецепторов колбочек. Хотя общая трехмерная структура палочковидного холофермента PDE6 была определена с помощью электронной микроскопии с негативным окрашиванием, четвертичная структура PDE6αβ, а также интерфейс между PDE6αβ и их ингибирующими субъединицами PDE6γ остаются неясными (Kameni Tcheudji et al., 2001; Гок и др., 2010). Кроме того, недостаточно изучена гетерогенность палочкообразных каталитических субъединиц PDE6α и β с точки зрения их взаимодействия с PDE6γ.Имеются данные о том, что PDE6γ может образовывать характерные структурные и функциональные взаимодействия с субъединицами PDE6α и PDEβ (Guo et al., 2005). Несмотря на то, что субъединицы палочек и колбочек PDE6 имеют сходную доменную организацию, подробные структурные отношения между PDE6α’ и γ’ неизвестны, и колбочки PDE6 могут иметь различный способ регуляции и, следовательно, демонстрировать различную ферментативную кинетику. Записи отдельных клеток из палочек, экспрессирующих PDE6α’γ и PDE6α’γ’, дадут подробную информацию о свойствах передачи световых сигналов между двумя типами палочек и могут показать, играет ли PDE6γ’ роль в более быстрой реакции колбочек на свет.Идеальной моделью для проведения этого эксперимента была бы нокаутированная линия мышей с заменой эндогенной PDE6γ на колбочковую PDE6γ’. У этих мышей ФДЭ6γ экспрессируется на том же уровне, что и ФДЭ6γ у мышей дикого типа, поэтому можно сравнить подробную кинетику реакции на свет. Записи отдельных клеток здесь не проводились из-за стохастического характера экспрессии вектора AAV.

В нашем предыдущем исследовании мы показали, что визуальные характеристики палочек, измеренные по оптомоторным реакциям, значительно улучшились у мышей rd10 , получавших PDE6α’, но остались на низком уровне по сравнению с контрольной группой дикого типа (Deng et al., 2013). Мы ожидаем аналогичного улучшения остроты зрения у мышей rd10/cpfl1 , получавших только PDE6α’ или смесь PDE6α’γ’. Мы также отмечаем, что хотя улучшенные фотопические ответы ЭРГ были получены при совместной инъекции векторов, экспрессирующих как PDE6α’, так и PDE6γ’, существует вероятность того, что эти фотопические записи были частично получены из палочек, экспрессирующих колбочки PDE6α’γ’. Эти палочки могли быть десенсибилизированы и не могли быть насыщены в стандартных скотопических условиях, хотя наши фотопические записи ЭРГ были выполнены после более длительного, чем стандартное, времени воздействия света для насыщения нормальных палочек.Одним из подходов к решению этой проблемы может быть экспрессия PDE6γ’ под промотором, специфичным для колбочек, вместо конститутивного промотора, такого как CBA. Однако наш лучший промотор, предпочтительный для колбочек, все еще обеспечивает некоторый уровень экспрессии в палочках мышей (Dyka et al., 2014).

Таким образом, мы показываем, что колбочка PDE6α’ имеет более высокое сродство к своему партнеру PDE6γ’, чем к палочке PDE6γ, и что присутствие PDE6γ’ помогает стабилизировать голофермент колбочки PDE6 и увеличить его сборку. Это открытие может иметь важное значение для разработки будущих исследований генной терапии для лечения пациентов с ахроматопией, связанной с PDE6α’.

Вклад авторов

W-TD и SK разработали и провели эксперименты, а также написали рукопись. JL, PZ и VC провели эксперименты. AD внесла свой вклад в анализ данных. VR и WH участвовали в кураторстве исследования. W-TD, SK, AD, VR и WH внесли свой вклад в критический пересмотр рукописи.

Финансирование

Эта работа была поддержана грантом Национального института здравоохранения (NIH) T32EY021721 (для WH), неограниченными грантами отделениям офтальмологии в Университете Флориды от исследований по предотвращению слепоты (RPB; Нью-Йорк), Фондом исследования зрения макулы и АГТК Инк.Эта работа также была поддержана фондом запуска SK (WVU) и грантом NIH RO1EY017035 (для VR).

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fnmol.2018. 00233/полный#дополнительный материал

Заявление о конфликте интересов

WH и Университет Флориды имеют финансовую заинтересованность в использовании терапии AAV, и WH владеет акциями компании (AGTC Inc.), которая в будущем может коммерциализировать некоторые аспекты этой работы.

Остальные авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Ссылки

Аравинд, Л., и Понтинг, К.П. (1997). Домен GAF: эволюционная связь между различными фототрансдуцирующими белками. Тренды Биохим. науч. 22, 458–459. doi: 10.1016/s0968-0004(97)01148-1

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Артемьев Н.О. и Хамм, Х. Е. (1992). Двухсайтовое высокоаффинное взаимодействие между ингибиторной и каталитической субъединицами стержневой циклической ГМФ-фосфодиэстеразы. Биохим. J. 283, 273–279. дои: 10.1042/bj2830273

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Баррен Б., Гахар Л., Мурадов Х., Бойд К.К., Рамасвами С. и Артемьев Н.О. (2009). Структурные основы ингибирования фосфодиэстеразы 6 С-концевым участком γ-субъединицы. EMBO J. 28, 3613–3622.doi: 10.1038/emboj.2009.284

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Brennenstuhl, C., Tanimoto, N., Burkard, M., Wagner, R., Bolz, S., Trifunovic, D., et al. (2015). Целенаправленное удаление гена Pde6h у мышей выявляет межвидовые различия в наборе изоформ белков фототрансдукции колбочек и палочек. J. Biol. хим. 290, 10242–10255. doi: 10.1074/jbc.M114.611921

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чанг, Б., Grau, T., Dangel, S., Hurd, R., Jurklies, B., Sener, E.C., et al. (2009). Гомологическая генетическая основа мышиного мутанта cpfl1 и ахроматопсии человека связана с мутациями в гене PDE6C. Проц. Натл. акад. науч. США 106, 19581–19586. doi: 10.1073/pnas.00106

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Chang, B., Hawes, N.L., Pardue, M.T., German, A.M., Hurd, R.E., Davisson, M.T., et al. (2007). Две дегенерации сетчатки у мышей, вызванные миссенс-мутациями в β-субъединице гена фосфодиэстеразы цГМФ палочки. Видение рез. 47, 624–633. doi: 10.1016/j.visres.2006.11.020

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кот, Р. Х., Боундс, М. Д., и Аршавский, В. Ю. (1994). Сайты связывания цГМФ на фоторецепторной фосфодиэстеразы: роль в регуляции зрительной передачи с обратной связью. Проц. Натл. акад. науч. США 91, 4845–4849. doi: 10.1073/pnas.91.11.4845

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Дэн, В.Т., Сакураи К., Коландайвелу С., Колесников А.В., Динкулеску А., Ли Дж. и соавт. (2013). Колбочковая фосфодиэстераза-6α’ восстанавливает функцию палочек и придает отчетливые физиологические свойства палочковой фосфодиэстеразы-6β-дефицитной мыши rd10. J. Neurosci. 33, 11745–11753. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1536-13.2013

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Dyka, F.M., Boye, S.L., Ryals, R.C., Chiodo, V.A., Boye, S.E., and Hauswirth, W.W. (2014).Конус-специфический промотор для использования в генной терапии дегенеративных заболеваний сетчатки. Доп. Эксп. Мед. биол. 801, 695–701. дои: 10.1007/978-1-4614-3209-8_87

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фрэнсис, С. Х., Турко, И. В., и Корбин, Дж. Д. (2001). Циклические нуклеотидные фосфодиэстеразы: структура и функция. Прог. Нуклеиновая Кислота Рез. Мол. биол. 65, 1–52. doi: 10.1016/s0079-6603(00)65001-8

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гиллеспи, П.Г. и Биво, Дж. А. (1988). Характеристика фосфодиэстеразы фоторецептора бычьей колбочки, очищенной с помощью хроматографии на циклической GMP-сефарозе. J. Biol. хим. 263, 8133–8141.

Реферат PubMed | Академия Google

Гок А., Чами М., Лодовски Д. Т., Босхарт П., Моисеенкова-Белл В., Бэр В. и соавт. (2010). Структурная характеристика цГМФ фосфодиэстеразы стержня 6. J. Mol. биол. 401, 363–373. doi: 10.1016/j.jmb.2010.06.044

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гопалакришна, К.Н., Бойд К., Ядав Р. П. и Артемьев Н. О. (2016). Белок-подобный 1, взаимодействующий с арильным углеводородным рецептором, является обязательным шапероном фосфодиэстеразы 6, и ему помогает γ-субъединица его клиента. J. Biol. хим. 291, 16282–16291. дои: 10.1074/jbc.m116.737593

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Грановский А.Е., Наточин М., Артемьев Н.О. (1997). Субъединица γ цГМФ-фосфодиэстеразы палочки блокирует каталитический центр фермента. J. Biol. хим. 272, 11686–11689. doi: 10.1074/jbc.272.18.11686

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Го, Л.В., Грант, Дж.Э., Хаджипур, А.Р., Мурадов, Х., Арбабян, М., Артемьев, Н.О., и соавт. (2005). Асимметричное взаимодействие между γ-субъединицами циклической GMP фосфодиэстеразы стержня и αβ-субъединицами. J. Biol. хим. 280, 12585–12592. doi: 10.1074/jbc.M410380200

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Го, Л.В., Мурадов Х., Хаджипур А.Р., Зиверт М.К., Артемьев Н.О. и Руохо А.Е. (2006). Ингибирующая γ-субъединица палочковой цГМФ-фосфодиэстеразы связывает каталитические субъединицы в вытянутую линейную структуру. J. Biol. хим. 281, 15412–15422. doi: 10.1074/jbc.M600595200

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хайре, С.Е., Панг, Дж., Бойе, С.Л., Сокал, И., Крафт, К.М., Пальчевски, К., и др. (2006). Управляемая светом транслокация колбочек аррестина в колбочках постнатальной сетчатки мышей с нокаутом гуанилатциклазы-1, получавших AAV-GC1. Инвест. Офтальмол. Вис. науч. 47, 3745–3753. doi: 10.1167/iovs.06-0086

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гамильтон, С.Э., и Херли, Дж.Б. (1990). Ингибитор фосфодиэстеразы, специфичный для подмножества колбочек сетчатки крупного рогатого скота. J. Biol. хим. 265, 11259–11264.

Реферат PubMed | Академия Google

Kameni Tcheudji, J.F., Lebeau, L., Virmaux, N., Maftei, C.G., Cote, R.H., Lugnier, C., et al. (2001).Молекулярная организация бычьей палочки цГМФ-фосфодиэстеразы 6. J. Mol. биол. 310, 781–791. doi: 10.1006/jmbi.2001.4813

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Киршман, Л.Т., Коландайвелу, С., Фредерик, Дж.М., Данг, Л., Голдберг, А.Ф., Бэр, В., и соавт. (2010). Белок врожденного амавроза Лебера, AIPL1, необходим для жизнеспособности и функционирования фоторецепторных клеток колбочек. Гул. Мол. Жене. 19, 1076–1087. doi: 10.1093/hmg/ddp571

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Коландайвелу, С., Чанг Б. и Рамамурти В. (2011). Каталитические субъединицы фосфодиэстеразы-6 палочек (PDE6) восстанавливают функцию колбочек в мышиной модели, лишенной каталитической субъединицы колбочек PDE6. J. Biol. хим. 286, 33252–33259. doi: 10.1074/jbc.M111.259101

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Коландайвелу, С., Хуанг, Дж., Херли, Дж. Б., и Рамамурти, В. (2009). AIPL1, белок, связанный с детской слепотой, взаимодействует с α-субъединицей фосфодиэстеразы палочек (PDE6) и необходим для ее правильной сборки. J. Biol. хим. 284, 30853–30861. doi: 10.1074/jbc.M109.036780

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли, Т.С., Вольпп, К., и Эпплбери, М.Л. (1990). Структура фосфодиэстеразы цГМФ фоторецептора бычьей колбочки, полученная из клона кДНК. Проц. Натл. акад. науч. США 87, 293–297. doi: 10.1073/pnas.87.1.293

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Маджумдер А., Палберг Дж., Мурадов Х., Бойд К.К., Сампат А.П. и Артемьев Н.О. (2015). Замена колбочек на каталитические субъединицы фосфодиэстеразы 6 палочек в фоторецепторах палочек частично имитирует особенности световой адаптации. J. Neurosci. 35, 9225–9235. doi: 10.1523/JNEUROSCI.3563-14.2015

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Моу, Х., и Кот, Р. Х. (2001). Каталитический домен и домен GAF палочковидного гетеродимера цГМФ-фосфодиэстеразы (ФДЭ6) регулируются отдельными областями его ингибирующей γ-субъединицы. J. Biol. хим. 276, 27527–27534. doi: 10.1074/jbc.M103316200

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Панг, Дж. Дж., Чанг, Б., Кумар, А., Нусиновиц, С., Норвез, С. М., Ли, Дж., и другие. (2006). Генная терапия восстанавливает поведение, зависящее от зрения, а также структуру и функцию сетчатки у мышиной модели врожденного амавроза Лебера RPE65. Мол. тер. 13, 565–572. doi: 10.1016/j.ymthe.2005.09.001

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Панг, Дж.J., Lauramore, A., Deng, W.T., Li, Q., Doyle, T.J., Chiodo, V., et al. (2008). Сравнительный анализ трансдукции вектора in vivo и in vitro AAV в сетчатке новорожденных мышей: влияние серотипа и места введения. Видение рез. 48, 377–385. doi: 10.1016/j.visres.2007.08.009

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пириев Н.И., Ямашита С., Самуэль Г. и Фарбер Д.Б. (1993). Палочковый фоторецептор цГМФ-фосфодиэстераза: анализ α- и β-субъединиц, экспрессируемых в клетках почек человека. Проц. Натл. акад. науч. США 90, 9340–9344. doi: 10.1073/pnas.90.20.9340

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пириев Н.И., Ямасита С.К., Ших Дж. и Фарбер Д.Б. (2003). Экспрессия α’-субъединицы цГМФ-фосфодиэстеразы колбочкового фоторецептора в яичнике китайского хомячка, эмбриональной почке человека 293 и клетках ретинобластомы Y79. Мол. Вис. 9, 80–86.

Реферат PubMed | Академия Google

Цинь Н. и Бэр В.(1994). Экспрессия и мутагенез фосфодиэстеразы цГМФ фоторецептора стержня мыши. J. Biol. хим. 269, 3265–3271.

Реферат PubMed | Академия Google

Цинь, Н., Питтлер, С.Дж., и Бэр, В. (1992). In vitro изопренилирование и мембранная ассоциация палочек фоторецептора цГМФ фосфодиэстеразы α и β субъединиц, экспрессируемых в бактериях. J. Biol. хим. 267, 8458–8463.

Реферат PubMed | Академия Google

Ямадзаки, М., Ли, Н., Бондаренко, В.А., Ямадзаки, Р.К., Бэр, В., и Ямадзаки, А. (2002). Связывание цГМФ с доменами GAF в фоторецепторе цГМФ-фосфодиэстеразы (ФДЭ) палочек амфибий. Идентификация доменов GAF в субъединицах αβ ФДЭ и отдельных доменов в субъединице γ ФДЭ, участвующих в стимуляции связывания цГМФ с доменами GAF. J. Biol. хим. 277, 40675–40686. doi: 10.1074/jbc.M203469200

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чжан, С. Дж., Гао, С.З., Яо В. и Кот Р. Х. (2012). Функциональное картирование областей взаимодействия γ-субъединицы фосфодиэстеразы фоторецептора (PDE6) с каталитическим димером PDE6, трансдуцином и регулятором передачи сигналов G-белка 9–1 (RGS9–1). J. Biol. хим. 287, 26312–26320. doi: 10.1074/jbc.M112.377333

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Золотухин С., Бирн Б.Дж., Мейсон Э., Золотухин И., Поттер М., Чеснат К. и др. (1999). Очистка рекомбинантного аденоассоциированного вируса с использованием новых методов улучшает инфекционный титр и выход. Джин Тер. 6, 973–985. doi: 10.1038/sj.gt.3300938

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Создайте своих собственных лесных существ из сосновых шишек

В один из недавних осенних дней, когда от свежего воздуха хочется ухватиться за каждую волшебную секунду до захода солнца, мы с младшей дочерью наткнулись на большую сосновую рощу, когда гуляли. Земля под ними была мягкой, покрытой толстым слоем иголок, усеянным опавшими сосновыми шишками всех мыслимых размеров.

Моя дочь была в полном восторге. Видите ли, она немного коллекционер природы, всегда таскает с собой карманы, набитые вещами, которые она подбирает то здесь, то там. (Не могу передать вам, сколько камней прошло через стиральную машину в нашем доме.) Опустившись на колени среди сосновых иголок, она подбирала одну шишку за другой, внимательно рассматривая их и отбрасывая менее совершенные. Прежде чем я это понял, она несла такую ​​ненадежную стопку, что мне пришлось принести сумку, чтобы вместить их все.

Этот проект начинался как способ использовать собранные сокровища. И, боже, нам было так весело делать этих маленьких тварей. Даже дети постарше вскочили, часами просиживая за кухонным столом, весело вырезая фигурки из фетра и обсуждая оптимальное расположение выпученных глаз. В дополнение к большим семьям четырех милашек, найденных здесь, довольно много собственных творений моих детей, в том числе кошка, преследующая очаровательную крошечную мышь из сосновой шишки, появились в доме в последние дни.

Поделка из сосновых шишек с шаблоном в формате PDF для печати кусочков фетра, необходимых для изготовления снежной совы, ежа, бобра и енота из сосновых шишек. Нажмите, чтобы твитнуть

Мы решили, что наш зверинец станет отличным рождественским украшением. Он идеально подходит для детского стола, но с таким же успехом может стоять на каминной полке или полке в гостиной. Если вы устраиваете толпу на Рождество, вы можете рассматривать это как забавное занятие, чтобы развлечь гостей до или после еды. Просто соберите заранее сосновые шишки, установите стол для рукоделия в отдаленном месте и отправьте детей (да и взрослых тоже… не будем судить!) домой с очаровательным сувениром об их приезде. .

Расходные материалы, которые вам понадобятся:

  • сосновые шишки
  • Листы фетра разных цветов
  • пластиковые гугли-глазки разных цветов (по желанию… вместо них всегда можно нарисовать глаза)
  • черные и/или темно-коричневые ершики для труб
  • ватные шарики или наполнитель из полиэфирного волокна
  • ножницы для резки ткани
  • клей для рукоделия
  • пистолет для горячего клея
  • черный перманентный маркер мелкого или среднего размера
  • Существа из сосновых шишек Шаблоны для печати

Сортируй свои сосновые шишки.Для енота, полярной совы и бобра вам понадобится такой, который будет устойчивым, если его поставить вертикально на конец стебля конуса. Для ежа сосновая шишка будет лежать на боку, поэтому вам понадобится шишка, достаточно плоская с одной стороны, чтобы она не катилась. Дополнительные ножки могут помочь стабилизировать его, но постарайтесь найти ту, которая естественным образом опирается на одно место.

Сделать снежную сову из сосновой шишки

Вставьте кусочки ваты с ватного тампона (или небольшие кусочки наполнителя из полиэфирного волокна) в промежутки между коричневыми чешуйками.Продолжайте по всему конусу, но будьте осторожны, чтобы не переполнить; вы хотите, чтобы кончики весов были видны.

Выберите цвета фетра для клюва, мордочки, области вокруг глаз и крыльев совы. (Я выбрала белый и светло-коричневый, с желтым для клюва.) Используя выкройки, вырежьте по одной мордочке, клюву и области глаз, а также два крыла. Используя клей для рукоделия, соберите части лица, как показано ниже. Вы также можете использовать пистолет для горячего клея, но если у вас есть хороший клей для рукоделия, дети могут сделать эту часть сами без присмотра.

После сборки лица необходимо прикрепить крылья и лицо к телу. Для этого потребуется клеевой пистолет; если вы делаете несколько животных (или над проектом работают дети), вы можете сначала собрать все мордочки, дождавшись конца, чтобы приклеить весь горячий клей за один раз.

Когда вы закончите, ваша сова будет выглядеть примерно так:

«Снежный» слева, двоюродный брат-нонконформист справа. (Ежик есть в каждой семье.)

Сделать ежика из сосновых шишек

Этот милый ёжик — самая простая из всех моделей, и единственная, сделанная из сосновой шишки, которая лежит на боку, а не на конце.Все, что требуется, это вырезать форму лица и крошечную точку носа. Ножки для чистки труб не являются обязательными, но если ваша сосновая шишка не очень плоская с одной стороны, они помогут удерживать ее устойчиво, а не катиться по столу.

Используя шаблон, вырежьте лицо и нос из фетра. Приклейте нос к лицу и добавьте глаза. Если вы собираетесь делать ножки, разрежьте ершик пополам (примерно) и согните его в форме, похожей на две маленькие ножки, с длиной ершика (достаточно длинной, чтобы заправить чешуйки сосновой шишки, и приклейте на место) между ними.Положите сосновую шишку на бок на стол, чтобы найти самую плоскую часть. Затем переверните его, нанесите большой слой горячего клея туда, где вы хотите прикрепить ножки, затем прикрепите их и дайте высохнуть в течение нескольких минут.

Когда клей на ножках затвердеет, переверните сосновую шишку и приклейте лицо к острому концу шишки.

Сделать бобра из сосновой шишки

Это еще одна конструкция, которая опирается на конец стержня сосновой шишки, поэтому обязательно выбирайте относительно плоскую.Выберите цвета и вырежьте все детали: мордочку, морду, хвост, маленькие зубы и нос. Соберите лицо, как показано, и добавьте глаза. Несмываемым маркером нарисуйте линии крест-накрест на хвосте.

Если вы хотите добавить уши, вы можете сделать их из ершика для труб примерно так же, как лапки ежа. Вылепите два маленьких уха, соединенных отрезком ершика, который можно аккуратно заправить между чешуйками сосновой шишки.

С помощью горячего клея приклейте лицо с одной стороны рядом с заостренным концом сосновой шишки.Затем приклейте хвост к плоскому стволовому концу сосновой шишки. Убедитесь, что нарисованный вами рисунок смотрит вверх, а чтобы был виден хвост, предлагаю приклеить его то к одной, то к другой стороне (по отношению к мордочке).

Сделать енота из сосновой шишки

У этого маленького парня есть и другие детали, но к этому моменту вы уже профессионал, так что давайте займемся нашим последним другом из сосновых шишек.

Выберите цвета фетра (мы использовали светло-серый, темно-серый и белый) и вырежьте все детали: хвост и три его полоски, мордочку, два маленьких треугольника для ушей, два круга вокруг глаз, мордочку, и нос.Соберите их, как показано на фото ниже. В этом случае моя дочь решила, что не хочет добавлять пластиковые глаза, а вместо этого решила нарисовать их маркером. Вы можете сделать и то, и другое.

С помощью горячего клея приклейте хвост к хвостовику конуса полосками вверх. Еще раз, вы можете отложить его в сторону, чтобы он был более заметен. Затем приклейте лицо.

Если вы хотите добавить ножки, вы можете сделать их из ершика для труб. Поскольку хвост был приклеен к нижней части сосновой шишки, мы обернули ершик вокруг задней части шишки, продели его между чешуйками, а затем скрутили два конца спереди, чтобы они выглядели как ноги.(Вы можете добавить каплю горячего клея, чтобы закрепить ершик на месте, если хотите, но это, вероятно, не обязательно.)

Когда наш зверинец был готов, следующим шагом было дать им дом.

К счастью, наши дети переросли этап пережевывания всего, что помещается у них во рту (не то, чтобы вы узнали об этом, взглянув на счет за продукты). Но когда мы украшаем к праздникам, я беспокоюсь о посетителях, потому что многие растения, которые мы традиционно видим на Рождество, включая падуб, омелу и (в меньшей степени) пуансеттию, токсичны при попадании внутрь.Мы редко покупаем пуансеттию, единственная омела в нашем доме поступила из отдела шелковых цветов Hobby Lobby, и хотя наши кусты падуба каждую зиму покрываются ярко-красными ягодами, мы редко используем их в помещении из-за большой осторожности.

Однако в поле перед нашим домом случайно растет восточный красный кедр (который, как оказалось, вовсе не кедр). Ветви тяжелые с прекрасными, голубоватыми ягодами. Ароматная листва великолепного темно-зеленого цвета, а поскольку ягоды можжевельника используются в традиционной медицине, я почти не беспокоюсь о том, что маленькие гости решат их перекусить.

Собрав ветки, полные ягод, мы разложили их в центре стола и добавили животных из сосновых шишек. Мы думаем, что они станут прекрасным домом для наших лесных друзей!

Мои дети и я получили огромное удовольствие от этого проекта, и у них остались удивительные воспоминания, и нам не терпится показать наши творения друзьям и близким, которых мы приветствуем в нашем доме на это Рождество.

Несмотря на то, что праздничный сезон может быть беспокойным, я искренне надеюсь, что вы выделите пару часов со своими детьми, чтобы взять несколько сосновых шишек, взять ножницы и клей и оставить себе незабываемые воспоминания.

 

Загрузить Шаблоны для печати «Создания из сосновых шишек» в качестве руководства по изготовлению деталей из войлока, необходимых для этих
снежных сов, ежа, бобра и енота из сосновых шишек.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

2015-2019 © Игровая комната «Волшебный лес», Челябинск
тел.:+7 351 724-05-51, +7 351 777-22-55 игровая комната челябинск, праздник детям челябинск